![]() Главная страница Случайная страница Разделы сайта АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника |
Область I область II область III
В.
orib orib’ orig
DHFR зона активности ori 2BE2121
Т.п.н.
Рис. 3.9. Организация некоторых ОНР у эукариотов А. Минимальная область автономно реплицирующейся последовательности ARS2404 S. pombe. Обозначены размеры существенных областей I, II и III и расстояния между ними. Жирной линией указано положение зоны инициации репликации, идентифицированной методом двумерного электрофореза В. Локус DHFR областей начала репликации (orib, orib’ и orig) в клетках СНО китайского хомячка
Анализ возможных ОНР у высших эукариотов оказался весьма затруднительным из-за отсутствия хромосомных фрагментов ARS, которые в плазмидах реплицируются столь же эффективно, как и в хромосомной ДНК. Выделить такие ОНР методом клонирования на плазмидах невозможно. В лучшем случае они очень неэффективны в роли ARS. Поэтому для идентификации областей хромомомы, в которых происходит инициация репликации, приходится использовать более сложные методы, имеющие недостаточно высокую разрешающую способность. Первый метод физического картирования ОНР в клетках млекопитающих основан на двумерном электрофорезе в агарозном геле рестрикционных фрагментов хромосом, выделенных из синхронизированной в фазе S клеточного цикла культуры клеток. При разделении в первом направлении используют низкую концентрацию агарозы и небольшую напряженность электрического поля. В этих условиях фрагменты ДНК разделяются в соответствии с их молекулярными массами независимо от формы. При разделении в направлении, перпендикулярном первому, применяют условия, в которых электрофоретическая подвижность фрагментов ДНК становится зависящей от формы (высокую концентрацию агарозы, низкую температуру и высокую напряженность). Линейные нереплицированные молекулы ДНК, имеющие одинаковую подвижность в обоих условиях, располагаются после двумерного электрофореза на диагонали агарозной пластинки. Разветвленные, имеющие форму буквы Y фрагменты, содержащие одну репликативную вилку, мигрируют более медленно, чем линейные, и образуют выше диагонали дугу с восходящей и нисходящей ветвями. Еще медленнее мигрируют фрагменты ДНК, в центре которых расположена область инициации двунаправленной репликации, т.е. пузырек ДНК. Они образуют дугу с восходящей ветвью, расположенную выше дуги Y-фрагментов (рис. 00). Для визуализации в геле нужных фрагментов ДНК применяют гибридизацию с радиоактивно меченными зондами, соответствующими анализируемой области генома. Этот метод позволяет установить примерное положение области инициации двунаправленной репликации. Забиваем Сайты В ТОП КУВАЛДОЙ - Уникальные возможности от SeoHammer
Каждая ссылка анализируется по трем пакетам оценки: SEO, Трафик и SMM.
SeoHammer делает продвижение сайта прозрачным и простым занятием.
Ссылки, вечные ссылки, статьи, упоминания, пресс-релизы - используйте по максимуму потенциал SeoHammer для продвижения вашего сайта.
Что умеет делать SeoHammer
— Продвижение в один клик, интеллектуальный подбор запросов, покупка самых лучших ссылок с высокой степенью качества у лучших бирж ссылок. — Регулярная проверка качества ссылок по более чем 100 показателям и ежедневный пересчет показателей качества проекта. — Все известные форматы ссылок: арендные ссылки, вечные ссылки, публикации (упоминания, мнения, отзывы, статьи, пресс-релизы). — SeoHammer покажет, где рост или падение, а также запросы, на которые нужно обратить внимание. SeoHammer еще предоставляет технологию Буст, она ускоряет продвижение в десятки раз, а первые результаты появляются уже в течение первых 7 дней. Зарегистрироваться и Начать продвижение
|