Установление половой принадлежности крови

Методики определения половой принадлежности крови, как правило, основаны на выявлении в ядрах форменных элементов крови Y- или Х-хроматина. Кроме того, половое дифференцирование крови возможно путем выявления морфологических различий в строении ядер гранулоцитов при использовании специфических методов окраски.

Ядра нейтрофильных, эозинофильных и базофильных лейкоцитов имеют сегментарное строение, т.е. состоят из двух или более сегментов. При чем ядра некоторых лейкоцитов имеют дополнительные структурные образования, различной формы выросты, обладающие половой специфичностью.

Наиболее часто встречающимся и характерным признаком, несущим определенную информацию о половой принадлежности является почкующийся вырост, внешне имеющий некоторое визуальное сходство с барабанной палочкой. Его условно обозначают буквой А. Это ничто иное, как скопление хроматина, сконцентрированное преимущественно в утолщенной части данного структурного образования. Связь выроста с ядром осуществляется посредством тонкой слабо окрашивающейся хроматиновой нити. Часть выроста, содержащая скопление хроматина окрашивается более интенсивно, чем ядро в целом, что позволяет его легко визуализировать с помощью специальных методов окраски. Наличие и выявление структурных образований типа А свидетельствует о том, что образцы исследуемой крови принадлежат лицу женского пола.

Кроме выроста типа А некоторой половой специфичностью обладает отросток типа В. По своей сути это ничто иное, как локальное выпячивание ядра, сообщающееся с последним при помощи толстой укороченной ножки. Образования типа В также характерны для женской крови. В судебно-медицинской практике выросты А и В рассматриваются как эквивалент полового Х-хроматина.

Однако следует отметить, что вышеописанная методика не отличается абсолютной достоверностью, т.к. вышеуказанные морфологические образования спорадически встречаются и в лейкоцитах мужской крови.

С этих позиций более достоверной является методика выявления половых хроматинов, из которых Х-хроматин встречает я только в клетках женского организма, а Y- хроматин с присущ только мужским клеткам.

Выявление Х-хроматина. Впервые Х-хроматин был обнаружен в 1949 году при исследовании нейронов головного мозга кошек. В последствие эти образования получили название телец Барра. В формировании Х-хроматина на ранних стадиях эмбриогенеза принимает непосредственное участие материнская или отцовская Х-хромосома, находящаяся в неактивном состоянии. Вторая хромосома, присущая женским клеткам, активна и не выявляется. Диагностической значимостью обладает Х-хроматин, в виде глыбки располагающийся у внутренней поверхности кариолеммы и более интенсивно, чем другие структуры ядра воспринимающий ядерные красители.

Для выявления Х-хроматина кровь из исследуемых объектов выделяют путем предварительного экстрагирования уксусной кислотой с последующим центрифугированием полученного раствора. Центрифужный осадок переносят на предметное стекло и окрашивают азур и эозиновой смесью. Полученные препараты исследуют в световом бинокулярном стереомикроскопе. При этом на фиолетовом фоне ядерных структур клеток Х-хроматин выделяется четкими контурами и выглядит более интенсивно окрашенным.

Вероятность выявления полового хроматина на объектах исследования определяется многими факторами. Причем степень сохранности хроматина зависит не столько от давности образования кровяного следа, сколько от условий, в которых находился следонесущий объект. Своеобразным фиксатором структур хроматина в ядрах является процесс высыхания. Чем быстрее пятна крови подвергаются высушиванию, тем лучше сохраняются клеточные ядра и соответственно половой хроматин. При хранении в условиях пониженной влажности половой хроматин может выявляться в течении многих лет.

В условиях повышенной влажности интенсивно протекающие процессы аутолитического и гнилостного распада полового хроматина значительно затрудняют его выявление на объектах судебно-медицинского исследования.

Выявление Y-хроматина. Y-хроматин образован дистальными участками длинных плеч Y-хромосомы и определяется в виде четко контурирующегося тельца, расположенного в ядре и примыкающего к внутренней поверхности кариолеммы. Его выявляют при помощи специальной окраски с использованием производных акридина, чаще всего применяется водный раствор акрихина – флюорохром. При дальнейшем исследовании в люминесцентном микроскопе Y-хроматин выглядит в виде ярко флюоресцирующего четко очерченного фрагмента ядра.

Следует иметь в виду, что сегментоядерные лейкоциты и, прежде всего, нейтрофилы, являются довольно чувствительными по отношению к неблагоприятным внешним воздействиям, что может оказать негативное влияние на результаты исследования. Поэтому целесообразно исследовать лимфоциты с целью выявления Y- хроматина, в ядрах которых он лучше сохраняется.