Главная страница Случайная страница
Разделы сайта
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Количественное определение в крови метгемоглобина
|
|
(метод Л.Э.Горна).
Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения метгемоглобина в крови.
Мотивация: метгемоглобин образуется в результате реакции окисления железа в геме гемоглобина
HbFe+2 + e ¾ MetHbFe+3, т.е. MetHb образование идет под действием любых веществ с дефицитом e¾ . Этому способствует изменение конформации белковой части молекулы гемоглобина вследствие окисления ряда функциональных групп белка. В крови здорового человека содержание метгемоглобина не более 3%, что достигается равновесием между реакциями его образования и реакциями восстановления метгемоглобина. Из реакций восстановления наиболее значимыми являются следующие:
причем, НАДФН+Н+ образуется в ключевых реакциях ПФЦ
причем, НАДН+Н+ образуется в ключевых реакциях гликолиза.
причем, данная реакция является неферментативной. Если содержание метгемоглобина в крови превышает 3%- это называется метгемоглобинемия. Метгемоглобинемии делятся на врожденные и приобретенные. Врожденная метгемоглобинемия имеет место при энзимопатиях и гемобинозах. Энзимопатии – генетически обусловленные нарушения синтеза ключевых ферментов, участвующих в восстановлении МеtHb или ключевых ферментов ПФЦ, генерирующих восстановленный НАДФН. Гемоглобинозы делятся на гемоглобинопатии – генетически обусловленные нарушения строения белковой части Hb, возникающие в результате точечных мутаций, и талассемии – состояния развивающиеся в результате генетически обусловленного снижения синтеза какой либо из цепей Hb.
— Регулярная проверка качества ссылок по более чем 100 показателям и ежедневный пересчет показателей качества проекта.
— Все известные форматы ссылок: арендные ссылки, вечные ссылки, публикации (упоминания, мнения, отзывы, статьи, пресс-релизы).
— SeoHammer покажет, где рост или падение, а также запросы, на которые нужно обратить внимание.
SeoHammer еще предоставляет технологию Буст, она ускоряет продвижение в десятки раз, а первые результаты появляются уже в течение первых 7 дней. Зарегистрироваться и Начать продвижение
Приобретенные метгемоглобинемии делятся в зависимости от причины на эндогенные и экзогенные. Эндогенная метгемоглобинемия может возникать при различных патологических состояниях или заболеваниях, которые сопровождаются недостаточностью АОС (например: хронический энтерит, хронический гепатит, сахарный диабет и другие).
Экзогенная метгемоглобинемия возникает в случае избыточного поступления в организм человека окислителей, в том числе и лекарственных препаратов со свойствами окислителей. Так как MetHb теряет способность транспортировать О2, метгемоглобинемия сопровождается признаками гемической гипоксии, которые обусловлены различными нарушениями в обмене веществ. Для профилактики и лечения осложнений необходимо контролировать уровень MetHb в крови.
Быстрым, нетрудоемким методом определения % содержания MetHb в крови является фотоколориметрический метод Л.Э.Горна. Этот метод удобен как для профилактического обследования людей, контактирующих с MetHb образователями, так и в гигиенических исследованиях при производственных и пищевых отравлениях некоторыми химическими соединениями (нитриты,
оксиды азота, пары нитробензола, нитроанилин, гексацианоферрат калия, хлорат калия и др.), при проведении токсикологических исследований на животных.
— Разгрузит мастера, специалиста или компанию;
— Позволит гибко управлять расписанием и загрузкой;
— Разошлет оповещения о новых услугах или акциях;
— Позволит принять оплату на карту/кошелек/счет;
— Позволит записываться на групповые и персональные посещения;
— Поможет получить от клиента отзывы о визите к вам;
— Включает в себя сервис чаевых.
Для новых пользователей первый месяц бесплатно. Зарегистрироваться в сервисе
Принцип метода: метод основан на определении оптической плотности раствора, содержащего метгемоглобин. Метгемоглобин избирательно погло-щает свет с длиной волны 619 нм. Содержание метгемоглобина рассчитывают в процентах, принимая за 100% оптическую плотность раствора полностью окисленного (гексацианоферратом) гемоглобина. Эритроциты разрушают в аммиачной среде.
Ход работы:
В три пробирки отмеривают по 7, 3 мл 0, 25% раствора аммиака. В две пробирки вносят по 0, 2 мл крови, взятой у крысы до затравки. Первая пробирка содержит HbO2 (100%). Во вторую пробирку добавляют 1 каплю насыщенного раствора K3[Fe(CN)6], принимая ее за эталон со 100% содержанием MetHb. В третью пробирку отмеривают 0, 2 мл крови крысы, отравленной нитритом натрия или другими метгемоглобинообразователями, и определяют в этой крови MetHb.
Пробы оставляют стоять в течение одного часа при комнатной температу-ре, затем растворы фотометрируют, определяя их оптическую плотность. Условия колориметрии: светофильтр красный (длина волны 610 нм), кювета - 10 мм, сравнение против воды.
Для расчета процентного содержания метгемоглобина в исследуемой пробе используют формулу:
Х% MetHb = (D MetHb оп – D HbO2) · 100
D MetHb 100% – D HbO2
DHbO2 – оптическая плотность раствора, не содержащего метгемоглобин (кровь, взятая до затравки крысы);
DMetHb100%. – оптическая плотность раствора, содержащего метгемо-глобин в максимальной концентрации;
DMetHbоп – оптическая плотность раствора, содержащего метгемоглобин в неизвестной концентрации (кровь крысы, затравленной нитритом).
Лабораторная работа № 14
|
|