Количественное определение белков методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого

Около 1, 0095 г (точная навеска) лиофилизированного маточного молочка поместили в мерную колбу на 100 мл. Довели водой до метки. Взяли 1 мл полученного раствора и поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Затем добавили 1 мл малахитового зеленого и довели водой до метки. Спектр поглощения полученного раствора измеряли на спектрофотометре СФ – 56, в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Параллельно проводили такое же определение со стандартным раствором альбумина, содержащего 9, 98% белка. Максимальная оптическая плотность для маточного молочка наблюдалась при 343 нм (Рисунок 2) и при 342 нм для стандартного раствора альбумина (Рисунок 3).

Рисунок 2 - Спектр поглощения маточного молочка с малахитовым зеленым

Рисунок 3 - Спектр поглощения стандартного раствора альбумина с малахитовым зеленым

Содержание белка рассчитывали по формуле (2):

, (2)

гдеАх – оптическая плотность исследуемого раствора;

Аст – оптическая плотность раствора альбумина с концентрацией 9, 98%;

ах – навеска лиофилизированного маточного молочка;

С% – концентрация стандартного раствора альбумина;

Wx(1), (2), Wст.(1), (2) – объемы мерных колб;

Vст. – объем аликвоты стандартного раствора альбумина;

Vх – объем аликвоты полученного раствора маточного молочка.

Результаты количественного определения белка в лиофилизированном маточном молочке методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Результаты количественного определения белка с использованием красителя малахитового зеленого в лиофилизированном маточном молочке

№ п/п	Содержание белка, %(Хi)	хi-xср	(хi-xср)2	Метрологические характеристики
1.	7, 35	0, 13	0, 0169	S= = =0, 1741   Sx = = =0, 0711   ∆ x= = 0, 0711*2, 571=0, 1827     ε = 2, 5%
	7, 21	-0, 01	0, 0001
3.	7, 00	-0, 22	0, 0484
4.	7, 48	0, 26	0, 0676
5.	7, 09	-0, 13	0, 0169
6.	7, 18	-0, 04	0, 0016
	Xср =7, 22		Σ (Xi-Xср)² =0, 1515

t – коэффициент Стьюдента при числе степеней свободы f = n – 1 и двухсторонней доверительной вероятности Р (0, 95).

Количественное определение белков методом спектрофотометрии с использованием красителя малахитового зеленого также было проведено для нативного маточного молочка. Максимальная оптическая плотность для нативного маточного молочка наблюдалась при 352 нм. Результаты количественного определения представлены в таблице 5.

Таблица 5.

Результаты количественного определения белка с использованием красителя малахитового зеленого в нативном маточном молочке

№ п/п	Содержание белка, %(Хi)	хi-xср	(хi-xср)2	Метрологические характеристики
1.	7, 85	0, 18	0, 0324
	7, 71	0, 04	0, 0016	∆ x= = 0, 0634*2, 571=0, 163   ε = 2, 1%
3.	7, 43	-0, 24	0, 0567
4.	7, 55	-0, 12	0, 0144
5.	7, 68	0, 01	0, 0001
6.	7, 79	0, 12	0, 0144
	Xср =7, 67		Σ (Xi-Xср)² =0, 1205

t – коэффициент Стьюдента при числе степеней свободы f = n – 1 и двухсторонней доверительной вероятности Р (0, 95).