Эмбриона.

Овоскопия: поместить эмбрион на овоскоп и карандашом отметить границу воздушной полости.

Строение 12-дневного куриного эмбриона

воздушная хорион - аллантоисная

полость оболочка (ХАО)

эмбрион аллантоисная полость

амниотическая желточный мешок

полость

белок

Заражение: скорлупу над воздушной полостью протирают спиртом, обжигают на огне, смазывают 2% настойкой йода, снова протирают спиртом и обжигают. Для заражения на ХАО изогнутыми ножницами срезают скорлупу над воздушной полостью, пинцетом снимают часть подскорлупной оболочки, исследуемый материал в объеме ________ наносят на ХАО (конец иглы не должен быть ниже границы воздушной полости). Отверстие в скорлупе закрывают покровным стеклом и заливают воском или парафином.

Для заражения в аллантоисную полость через прокол в скорлупе вводят иглу шприца так, чтобы конец иглы был ниже уровня воздушной полости на ______. Отверстие в скорлупе заливают воском.

Вскрытие куриных эмбрионов проводят с соблюдением правил асептики. Скорлупу над воздушной полостью обрабатывают так же, как при заражении, и срезают ножницами чуть выше границы прикрепления хорион-аллантоисной оболочки. Визуально оценивают состояние ХАО (помутнение, наличие бляшин и т.д.). Аллантоисную жидкость насасывают пипеткой после прокола ХАО в месте, лишенном крупных кровеносных сосудов. Затем ХАО разрезают ножницами и через отверстие выливают все содержимое в чашку Петри. Амниотический мешок так же разрезают, освобождают от эмбриона, просматривают на наличие поражений.

Работа №2: Культуры клеток для культивирования вирусов.

Работа №3: Питательные среды для культур клеток:

1.Сбалансированные солевые растворы - раствор Эрла, Хенкса

2. Ростовые среды:

а) естественные – среда Эндерса: _______________________________

б) гидролизаты – _____________________________________________

в) синтетические – среда Игла: __________________________________

среда 199: ___________________________________

_______________________________________________

Перед использованием ко всем средам добавляется________________

_____________________. Большинство сред содержат индикатор – феноловый красный, чтобы оценивать состояние культур клеток (если его нет, то необходимо внести в среду).

Работа №4: Методы индикации вирусов

а ) ц итопатическое действие (ЦПД)- к ультуры клеток изучают под малым увеличением микроскопа в исходном состоянии или после окраски анилиновыми красителями. Нормальные клетки фибробластов располагаются на стекле в виде монослоя и имеют четко выраженную структуру. Вирусы при размножении в клетках вызывают их дегенерацию.

нормальные ЦПД -

фибробласты дегенерация

б) р еакция гемагглютинации – РГА:

Компоненты:

1) смыв из носа - вируссодержащий материал

2) 1% взвесь куриных эритроцитов.

Механизм реакции: ___________________________________________

___________________________________________________________

____________________________________________________________

Результат:

Заключение: в исследуемом материале содержится вирус, потому что

___________________________________________________________

___________________________________________________________

в) реакция гемадсорбции – РГадс проводится на ХАО куриного эмбриона или на культуре клеток после внесения на них исследуемого материала. Если в исследуемом материале есть вирус, то после добавлении взвеси куриных эритроцитов, эритроциты приклеиваются – адсорбируются на клетках. Изучают РГадс на ХАО – невооруженным глазом, на культуре клеток – под малым увеличением микроскопа.

г) включения в пораженных клетках

цитоплазматические -