Стандартизация (ТП 4)

Все инъекционнные растворы подвергаются испытаниям на:

1. отсутствие механических включений;

2. стерильность;

3. бактериальные эндотоксины или пирогенность.

Проверка на механические включения.

Видимые частицы. Контроль растворов на отсутствие механических загрязнений осуществляется невооруженным глазом в затемненном помещении на освещённых белом и черном фонах. Расстояние от глаз контролера до ампул - 25 см.

Контролер берет ампулу в руку, вносит в зону просмотра в положении вверх донышками и просматривает на белом и черном фонах в течение около 5 секунд. Затем ампулы плавным движением переворачивают в положение вниз донышками и также просматривают на белом и черном фонах.

Невидимые частицы. Подсчёт количества частиц в режиме светотени. Метод основан на блокировке подачи света, который позволяет автоматически определять размеры и количество частиц. Содержимое ампул смешивают в чистой емкости до получения объема не менее 25 мл. Отбирают 4 пробы, каждая объемом не менее 5 мл. Определяют количество частиц размером от 10 мкм и 25 мкм. Исключают результат, полученный для первой пробы, рассчитывают среднее количество частиц в испытуемом образце. Раствор выдерживает испытание, если среднее количество частиц размером от 10 мкм не превышает 6000 в одном контейнере и количество частиц размером от 25 мкм – 600 в одном контейнере. Если количество частиц превышает допустимые нормы, используют метод подсчета количества частиц при помощи микроскопа.

Проверка стерильности.

Всей партии, загруженной в автоклав, присваивается определенный номер серии. Эта партия так и называется – стерильная серия. Из простерилизованных ампул часть отбирается на бактериологический анализ в лабораторию. Там производиться вскрытие ампул в строго асептических условиях и посев раствора на питательные среды.

Если хотя бы из одной ампулы раствор дал рост, вся серия считается нестерильной.

Метод мембранной фильтрации. Содержимое контейнера переносят на мембрану фильтра, фильтруют. Мембрану переносят в питательную среду. Среды инкубируют не менее 14 дней. Если признаков микробного роста не обнаруживается, то продукт выдерживает испытание на стерильность.

Бактериальные эндотоксины или пирогенность.

ЛАЛ-тест

Испытание на бактериальные эндотоксины проводят для определения наличия или количества эндотоксинов, источником которых являются грамотрицательные бактерии, с использованием лизата амебоцитов мечехвоста. Существует три принципа проведения данного испытания: принцип гель-тромба, основанный на образовании геля; турбидиметрический принцип, основанный на помутнении в результате расщепления эндогенного субстрата; хромогенный принцип, основанный на появлении окраски после расщепления синтетического пептидно-хромогенного комплекса.

Существует шесть методов:

Метод А. Гель-тромб-метод: предельное испытание.

Метод В. Гель-тромб-метод: полуколичественное испытание.

Метод С. Турбидиметрический кинетический метод.

Метод D. Хромогенный кинетический метод.

Метод Е. Хромогенный метод конечной точки.

Метод F. Турбидиметрический метод конечной точки.

Испытание выполняют любым из этих шести методов. В сомнительных и спорных случаях окончательное решение принимают, основываясь на методе А.

Биологический метод состоит в измерении роста температуры тела кроликов. Используют здоровых взрослых кроликов массой не менее 1, 5 кг, лучше 2 – 3, 5 кг. Точность термометра – 0, 1 ⁰С. Термометр вводят в прямую кишку кролика на глубину около 5 – 7 см. Предварительные испытания: кроликам внутривенно вводят апирогенный раствор NaCl 9 г/л, нагретый до 37 ⁰С в количестве 10 мл/кг. Записывают температуру животных за 90 минут до введения раствора и в течение 3 часов после. Если температура колеблется более 0, 6 ⁰С животных далее не используют. Основное испытание проводят на трех кроликах. Испытуемый раствор вводят в крайнюю вену уха кролика. Определяют исходную и максимальную температуру (в течение трех часов после введения). Результат испытания – разница максимальной и исходной температуры. Далее проводится интерпретация результатов (таблица 3) [7].

Таблица 3 - Интерпретация результатов.