Методы посевов.

В зависимости от цели исследования, характера посевного материа­ла и среды используют разные методы посева. Все они включают обяза­тельную цель: оградить посев от посторонних микробов. Поэтому рабо­тать следует быстро, по без резких движений, усиливающих колебания воздуха. Во время посевов нельзя разговаривать. Посевы лучше делать в боксе.

Посев из пробирки в пробирку. Пробирку с посевным материалом

и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Обычно пробирку с по­севным материалом держат ближе к себе. В правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю, и стерилизуют ее, держа вертикально в пламени горелки. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки одновременно. Извлекают пробки не рывком, а плавно - легкими винтовыми движениями. Вынув пробки, края пробирок обжигают в пламени горелки. Прокаленную петлю вводят через пламя [горелки в пробир­ку с посевным материалом, охлаждают и, набрав немного материала, ос­торожно переносят в пробирку со средой.

При посеве в жидкую среду посевной материал растирают на стенке пробирки над жидкостью и смывают средой.

При посеве на жидкие среды тампоном его погружают в среду и 3-5 секунд ополаскивают в ней. При посеве па плотную среду материал вти­рают в ее поверхность, вращая тампон, после чего тампон обеззаражива­ют (помещают в пробирку, в которой он был доставлен в лабораторию, и автоклавируют).

При посеве на скошенный агар материал обычно растирают на по­верхности среды зигзагообразными движениями снизу вверх, начиная от границы конденсата.

При посеве на плотные среды, разлитые в пробирки столбиком, петлёй с посевным материалом прокалывают столбик, производя так называемый посев «уколом».

После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирки обжигают и, проведи пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокалывают петлю.

Посев жидкого материала можно производить стерильными пипетками (пастеровскими или градуированными). После посева пипетки погружают в дезинфицирующую жидкость. Посев во флаконы, матрацы и бутыли производят примерно так, как в пробирки, только сначала набирают материал (петлёй или в пипетку), а потом открывают сосуд со средой.

Сосуды с засеянной культурой надписывают и ставят в термостат.

Посев на пробирки с чашки Петри.

Изучив характер роста культуры на чашке, со стороны дна отмечают восковым карандашом нужный для посева участок. Чашку с посевным материалом ставят перед собой крышкой вверх. Левой рукой приоткрывают крышку и вводят под неё обожженную петлю. Остудив петлю, закрывают чашку и в левую руку берут пробирку со средой. Посев производят так же, как с пробирки в пробирку. После посева чашку переворачивают вверх дном.

Посев на агар в чашке Петри

Посев шпателем. Шпатель-это стеклянная или металлическая трубочка, конец которой загнут виде треугольника. Шпатель можно сделать из пастеровской пипетки, согнув под углом её тонкий конец, предварительно разогретой в пламени горелки.

Левой рукой слегка приоткрывают крышку, держа её большим и указательным пальцами. Петлёй, пипеткой или стеклянной палочкой наносят на поверхность среды посевной материал, после чего тщательно втирают его круговыми движениями шпателя до тех пор, пока шпатель перестанет свободно скользить по поверхности среды, левой рукой при этом придерживают крышку и одновременно вращают чашку. По окончании посева шпатель вынимают из чашки и закрывают крышку. Стеклян­ной ниппель помещают в дезинфицирующий раствор, а металлический прокаливают и пламени горелки.

Посев петлей. Небольшое количество посевногоматериала (иногда его предварительно эмульгируют и стерильном изотоническом растворе или бульоне) втирают петлей и поверхность среды у края чашки, несколько раз проводя петлей из стороны в сторону. Затем у того места, где закончились штрихи, агар прокалывают истлей, снимая избыток посевного

материала. Оставшийся па петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют по всей поверхности среды, По окончании по­сева закрывают чашку и прожигают петлю.

Посев петлей на секторы. Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы. 11осев производят зигзагообразными движениями от края чашкик центру. Необходимо следить, чтобы штрихи не заходили на соседний сектор.

Посев тампоном. Тампон с посевным материалом вносят в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в

поверхность среды, вращая при этом тампон и чашку.

Посек газоном. Примерно 1 мл (20 капель) жидкой культуры (если культура с плотной среды, ее эмульгируют в стерильном изотоническом растворе или бульоне) наносят на поверхность агара и тщательно распределяют жидкость по поверхности среды. Чашку слегка наклоняют и пи­петкой отсасывают избыток культуры, выливая ее в дезинфицирующий раствор. Туда же помещают пипетку.

Посев а толщу агара. Культуру, выращенную на жидкой среде, или эмульгированный материал вносят в сосуд с расплавленным, и остуженным до 45⁰С шаром, перемешивают и выливают в стерильную чашку Петри. Можно внести посевной материалов пустую чашку и залить 15-20 мл остуженного до 45^оС агара. Для перемешивания содержимого чашки её слегка покачивают и вращают. Чашки оставляют на столе до застывания среды.

Засеянные чашки подписывают со стороны дна и помещают вверх дном в термостат.

Методы культивирования

Культивирование анаэробов сложнее, аэробов, так как их необходимо лишить доступа свободного кислорода. Для этого удаляют воздух из питательной среды различными способами.

Культивирование актиномицетов, грибов, микоплазм, L-форм, спирохет и простейших. Культивирование этих микроорганизмов принципиально сходно с культивированием бактерий. Для них разработан специальные среды и подобранны режимы соответствующие их потребностям.

Культивирование риккетсий и вирусов. Риккетсии и вирусы являются облигатными паразитами, то есть могут развиваться только в живых клетках. Их культивируют в культурах тканей, организме экспериментальных животных, развивающихся куриных эмбрионах.