Список для проверки рабочих мест. Одно рабочее место рассчитано на 4 учеников

Замечания по обмену образцами: проследите, чтобы ученики менялись образцами в разных частях класса, а не с соседями. Лучше всего сделать это в виде раундов: каждый встает и совершает один «контакт» с кем-то другим, потом садится на свое место. Потом еще один раунд обменов и.т.п. Сколько потребуется раундов, зависит от вашего класса: мы рекомендуем использовать 1 «инфицированный» образец на 16 человек. Если в вашем классе менее 10 человек, то используйте 1 «инфицированный» образец и два раунда обменов.

Где можно остановиться: эта работа может быть выполнена за один урок, но вы можете остановить ее после того как ученики обменяются образцами и положить все реагенты в холодильник на +4º С на ночь. Вы также можете остановиться в любом месте, добавив буфер для промывки в лунки (после добавления антигена и перед добавлением субстрата пероксидазы) и убрать все реагенты и плашки на +4º С

Ответы на вопросы и темы для обсуждения для учителей

Вопросы до лабораторной работы

1. Как иммунная система защищает нас от болезней?

Врожденная иммунная система состоит из физических барьеров, таких как кожа или слизистые оболочки, которые препятствуют проникновению патогенов внутрь организма, и клеточного ответа, например, макрофагов, которые перемещаются по всему телу и окружают чужеродные тела или молекулы. Приобретенная иммунная система состоит из клонов специальных клеток (B и Т клеток), которые вырабатывают антитела, связывающиеся с чужеродным агентом или убивают чужеродные клетки (бактериальные или, например, раковые).

1. Как доктора используют наш иммунный ответ, чтобы защитить нас от болезней?

Доктора используют наш иммунный ответ при вакцинации. Наша иммунная система запоминает патогенов, с которыми мы столкнулись в жизни, и последующий ответ на них гораздо более быстрый и эффективный. Доктора используют эту способность к памяти и сталкивают нашу иммунную систему с инактивированными патогенами (например, убитыми или ослабленными бактериями, от которых мы не можем по-настоящему заболеть). У нас вырабатывается иммунитет против данного вида бактерий или вирусов и впоследствии когда мы столкнемся с ними, быстрый и сильный иммунный ответ нашего тела не даст инфекции развиться.

1. Каковы возможные пути передачи и распространения заболеваний?

1. Приведите пример болезней, атакующих человеческую иммунную систему

ВИЧ, аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, астма, волчанка, экзема, тяжелый комбинированный иммунодефицитный синдром). Более полный список можно найти в приложении А.

1. Какого рода бывают нарушения работы иммунной системы?

Нарушения работы иммунной системы можно разделить на три класса: иммунная недостаточность, гиперчувствительность и аутоиммунные болезни. Иммунная недостаточность –это неспособность организма создавать адекватный иммунный ответ на инфекции. Она может быть следствием наследственного нарушения, например тяжелый иммуннодефицитный синдром, приобретенной болезни (например, СПИД – следствие заражения вирусом иммунодефицита человека) или результатом приема подавляющих иммунитет лекарств (принимаемых, чтобы подавить отторжение донорских органов при трансплантации). Гиперчувствительность – это следствие слишком сильной реакции иммунной системы на антиген: примерами являются аллергические реакции, анафилактический шок и.т.п. Аутоиммунные заболевания - это следствие развития иммунного ответа на нормальные клетки тела. Это такие заболевания как волчанка, ревматоидный артрит, инсулин-зависимый диабет, множественный склероз и.т.п.

1. Почему при трансплантации органов необходимы иммунносупрессанты?

Лекарства, подавляющие иммунную систему, такие как преднизолон и циклоспорин, необходимы для того, чтобы наше тело не считало пересаженный орган чужеродным объектом, подлежащим уничтожению. Иммунносупрессанты делают пересадку органов возможной. Когда организм вырабатывает иммунный ответ на пересаженный орган, он отторгается. С другой стороны, действие иммунносупрессантов неспецифично, они подавляют все иммунные реакции, поэтому люди с пересаженными органами становятся легко подверженными разным инфекциям.

1. Почему важна быстрая диагностика заболеваний?

Быстрая диагностика заболеваний важна по нескольким причинам. Обычно ранее обнаружение болезни и ее причины позволяет раньше начать лечение и облегчить течение болезни или даже вообще предотвратить ее развитие. Также быстрая диагностика инфекции важна, чтобы предотвратить ее дальнейшее распространение среди населения.

1. Как расшифровывается ИФА?

И ммуно ф ерментный а нализ

1. Зачем в этом тесте используются ферменты?

С помощью ферментов мы видим, связались ли первичные антитела с антигеном в лунке. Первичные и вторичные антитела не видимы глазом, поэтому необходим какой-то метод их обнаружения. Фермент пероксидаза хрена соединен со вторичными антителами. Реакция с бесцветным субстратом приводит к его окислению с образованием окрашенного в синий цвет вещества. Изменение цвета возможно только если в образце присутствуют вторичные антитела и следовательно указывает на положительный результат теста.

1. Почему в тесте наряду с опытными образцами нужен положительный и отрицательный контроль?

Контроли необходимы для того, чтобы удостовериться, что эксперимент работает. Если у вас нет положительного контроля и ваш образец оказался отрицательным, вы не можете сказать, действительно ли он отрицательный, или просто весь ваш тест по какой-то причине не работает. И наоборот, без отрицательного контроля вы не можете быть уверены в том, что ваш тест не сработал по ошибке и не дал ложноположительный результат.

Вопросы к лабораторной работе

1. Образцы, которые вы добавляете в лунки плашки, содержат множество разных белков, а также могут содержать или не содержать антиген. Что случится с белками в составе образца в лунке в случае, если образец содержит антиген? Если не содержит?

И в том и в другом случае, белки будут связываться с пластиком плашки.

1. Почему необходимо на каждом этапе промывать лунки?

При промывке удаляются все белки несвязавшиеся с лунками, а также все антитела, не связавшиеся со своими антигенами. Если бы несвязавшиеся реагенты оставались в растворе, они могли бы дать ложноположительные результаты.

1. Что происходит, когда вы добавляете первичные антитела к образцам, содержащим антиген? Не содержащим антиген?

Если образец содержит антиген, первичные антитела связываются с ним, и остаются прикрепленными к стенкам лунки. Если антигена нет, антитела остаются в растворе и вымываются при промывке.

1. Что происходит, когда вы добавляете вторичные антитела к образцам, содержащим антиген? Не содержащим антиген?

Если образец содержит антиген, вторичные антитела связываются с первичными антителами, ранее связавшимися с антигеном. Если образец не содержал антигена, в нем нет и первичных антител (они были удалены при промывке) и вторичные антитела остаются в растворе и в свою очередь вымываются.

1. Если ИФА дал отрицательный результат по агенту, вызывающему болезнь, означает ли это, что у вас нет данной болезни? По каким причинам результат может быть отрицательным в случае если вы на самом деле больны?

Отрицательный результат не обязательно означает, что вы не больны. Он может быть ложноотрицательным. ИФА может быть не настолько чувствительным, чтобы определить крайне низкий уровень антигена, присутствующий сразу после момента инфекции. Другой причиной может быть ошибка эксперимента, например, в лунку с вашим образцом случайно был помещен отрицательный контроль.

1. Почему вы проводите анализ ваших образцов в трех повторностях?

Проведение анализа в трех повторностях – это еще один контроль. Если вы не получили одинаковый (положительный или отрицательный) результат во всех трех лунках, значит, у вас проблемы с выполнением эксперимента. В клинической лаборатории этот анализ пришлось бы переделывать. В данной лабораторной работе ориентируйтесь на результат в двух совпадающих лунках, так как он скорее является правильным.

1. Какие основанные на антителах тесты вы можете купить в аптеке?

Тест-системы, основанные на тех же принципах, что и ИФА, это например тесты на беременность и тесты на присутствие наркотиков, таких как кокаин или марихуана.

1. Если вы получили положительный результат теста в вашей работе, скажите, обменивались ли вы образцами с учениками, исходно получившими «зараженные» пробирки? Если нет, какие выводы вы можете сделать о распространении болезней в популяции?

Если вы находитесь в близком контакте с кем-либо, вы можете получить все инфекции, полученные тем человеком ранее при его других контактах.