Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток.

Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре +15 - +25⁰С.

На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают 0ab(анти-А+В), в середине - Аb (анти-В) и справа - Вa (анти-А), на верхнем крае – фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.

Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0, 1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп 2-х серий. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0ab(анти-А+В), Аb (анти-В) и Вa (анти-А).

Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0, 01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10: 1.

Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой.

После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают.

Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 минут. Агглютинация

начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Через 3 минуты в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0, 05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут.

Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации).

Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (см.табл.1).

Таблица 1

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - ее отсутствие.

Как видно из таблицы, результат оценивается в зависимости от реакции исследуемых эритроцитов со стандартными сыворотками группы Оab (анти-А+В), Ab (анти-В), Ba (анти-А). В тех случаях, когда положительный результат получен с сывороткой всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы ABo(IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой контрольной пробе позволяет учесть положительный результат с сыворотками групп Оab (анти-А+В), Ab (анти-В), Ba (анти-А) как истинный, т.е. принадлежность исследуемой крови к группе AB(IV). При наличии панагглютинации, т.е. агглютинации со всеми сыворотками и, соответственно, невозможности определить групповую принадлежность по системе АВО, кровь больного подлежит обязательному направлению на СПК или в ОПК для исследования специалистом-изосерологом.

3. Определение группы крови системы АВО моноклональными реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ.

Реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными гемагглютинирующими сыворотками.

Порядок проведения исследования:

На планшет или пластину индивидуальными пипетками нанести реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ по одной большой капле (0, 1 мл) под соответствующими надписями.

Рядом с каплями реагентов нанести по одной маленькой капле исследуемой крови (0, 01- 0, 03 мл).

Смешать кровь с реагентом (в лунке планшета – тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; на пластине – чистой индивидуальной сухой палочкой).

Наблюдение за ходом реакции с реагентами следует вести при легком покачивании пластины или планшета в течение 5 минут. Агглютинация эритроцитов обычно наступает в первые 3-5 сек., однако наблюдение следует продолжить ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Учет результатов реакции агглютинации при определении групп крови моноклональными реагентами представлен в таблице 2:

При положительном результате реакции агглютинации со всеми реагентами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов, для чего следует смешать на плоскости 1 каплю изотонического раствора хлорида натрия с 1 каплей исследуемых эритроцитов. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия.

Таблица 2

(+) – наличие агглютинации; (-) – отсутствие агглютинации