Главная страница Случайная страница
Разделы сайта
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Неспецифічна естераза (NSE). в клітинах кісткового мозку Метод азосполучення
|
|
Позначити:
- NSE-позитивні бластні клітини, ядро, цитоплазма з високою активністю NSE. (інтенсивний червоний або червоно-коричневий осад в цитоплазмі).
- Лімфоцити і бластні клітини із слабко вираженою активністю NSE.
При остром лейкозе, когда все клетки представлены бластами, один из способов идентифицировать эти бласты заключается в использовании цитохимических методов. Эти методы применяются как к мазкам (крови или костного мозга) так и срезам (костного мозга). Есть несколько различных цитохимических методов, которые обычно используются в гемопатологии, одним из них является реакция на неспецифическую эстеразу (NSE) с различными субстратами. Моноциты и их предшественники (промонобласты и монобласты) при этом окрашиваются интенсивно (красный или красно-коричневый цвет). Нейтрофилы и их предшественники (в т.ч. миелобласты), как и все другие типы клеток в костном мозге, являются отрицательными.
Принцип реакции: Альфа-нафтилацетат эстераза ускоряет гидролизное расщепление альфа-нафтилацетата до уксусной кислоты и альфа-нафтола, чьё соединение с диазониевой солью образует красно-коричневое окрашивание, нерастворимое в воде.)
Т.о, при лейкемии с большим количеством недифференцированных бластов при цитохимической реакции на NSE можно легко дифференцировать монобластную лейкемию (почти все клетки окрашены) от других видов (миелобластной)
Визначення ХОЛІНЕСТЕРАЗИ
Прямий тіохоліновий метод Karnovsky, Roots (1964) в модифікації
• Инкубационная среда
• ацетил- или бутирилтиохолиниодид 12, 5 мг
• растворить в дистиллированной воде 2, 5 мл
• 0, 82 %-ный ацетат натрия 15, 8 мл
• 0, 6 %-ная уксусная кислота 0, 5 мл
• 2, 94%-ный цитрат натрия 1, 5 мл
• 0, 75%-ный сульфат меди 2, 5 мл
• 0, 165%-ный феррицианид калия [калийгексацианоферрат(III)] 2, 5 мл
• ~25 мл
• Добавлять реактивы в приведенной последовательности и тщательно перемешивать. Раствор имеет светло-зеленый цвет (рН~5, 5)
•
• Инкубация: срезы, прикрепленные к стеклам, инкубируют в кюветах 10—180 мин при 37 °С, комнатной температуре или +4°С в холодильнике; можно инкубировать свободноплавающие срезы фиксированных тканевых блоков. Срезы после предварительной обработки в ацетоне должны быть не белыми, а слегка матовыми или светло-серыми
• Окончательная обработка
• Слить инкубационную среду. Промыть и поместить в дистиллированную воду
• Заключить в глицериновый гель или после обезвоживания в энтеллан или подобную среду
Структуры, обладающие ферментативной активностью, окрашиваются в красновато-коричневый цвет.
• Примечания. Отщепленный тиохолиниодид восстанавливает феррицианид до ферроцианида, который реагирует с ионами меди с образованием нерастворимого ферроцианида меди (пигмент Хэтчетта).
• Среду следует готовить непосредственно перед употреблением, так как она сохраняет стабильность только около 4 ч.
• Окрашивание происходит непосредственно в результате реакции. Это позволяет контролировать ход реакции визуально до полного проявления ферментативной активности и делает излишними контрольные проявления.
• Крайне важно соблюдать количественные соотношения веществ в инкубационной среде
• Ткани с высокой ферментативной активностью инкубируют при комнатной температуре или в холодильнике при +4°С; ткани с низкой ферментативной активностью инкубируют при 37°С в течение длительного времени, сменяя инкубационную среду каждые 3—4 ч.
АХЕ в кишечнику, тіохоліновий метод (червоно-коричневий пігмент Хетчетта, відкладення в капілярах ворсинок, гладком’язовому шарі стінки кишечника)
Позначити: відкладення пігменту Хетчетта в капілярах ворсинок (1), гладком’язовому шарі стінки кишечника (2)
Визначення активності мієлопероксидази.
Бензидиновий метод (Грэхема-Кнолля)
• Принцип: В присутності МПО бензидин окислюється перекисом водню до нестабільного бензидинового синього, який самовільно перетворюється на стабільний бензидиновий коричневий
• Реактиви:
• 4% формаліново-спиртовий р-н (10 ч. 40% форм.+ 90 ч. 96% спирта).
• Пероксидазний реактив: бензидин (5 мг) розчмняють в 6 мл 96% спирта, + 4 мл воды і 0, 02 мл 3% перекису водню. Реактив придатний протягом 5-6 днів.
• Барвник Романовського-Гімзи.
• Хід реакції:
• Свіжі мазки (1-2-доби) фіксують 4% формалін.-спирт. р-ном, 30 сек.
• Обмивають в проточній воді, висушують.
• Заливають пероксидазним реактивом на 5 хв.
• Ретельно промивают у проточній воді і висушують.
• Дофарбовують барвником Романовського-Гімзи.
• МПО виявляється в цитоплазмі клітин у вигляді золотаво- коричневих гранул.
АБО 
Мієлопероксидаза в мієлобластах кісткового мозку людини (Бензидиновий метод, + дозабарвлення за Романовським-Гімза)
|
|