Изучение влияния концентрации модельного соединения на жизнеспособность продуцента

Для проведения эксперимента были выбраны следующие исходные концентрации красителя Methyl Orange: 0, 01 мг/мл, 0, 05 мг/мл, 0, 1 мг/мл, 0, 5 мг/мл и 1 мг/мл.

Процесс осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750 мл в течение суток на круговой качалке при температуре 32º С. В колбы вносили 10 мл посевного материала III пассажа (3 суток роста), 140 мл 0, 1М раствора цитрат-фосфатного буфера (рН 4, 5) и соответствующее количество красителя Methyl Orange для достижения заданных концентраций. Общий объем раствора в каждой колбе составил 150 мл. В контрольные колбы вносили посевной материал и 0, 1М раствор цитрат-фосфатного буфера в заданных соотношениях.

Через сутки после начала эксперимента из каждой колбы был сделан высев на чашки Петри с агаризованным суслом в количестве 1 мл раствора, содержащего биомассу гриба. Осмотр чашек Петри производили через трое суток после высева. Результаты проведения эксперимента представлены на рисунке 11.

а) б)

в) г)

д) е)

Рисунок – 11. Высев на чашки Петри из колб, содержащих раствор с концентрацией красителя: а) контроль, б) 0, 01 мг/мл, в) 0, 05 мг/мл, г) 0, 1 мг/мл, д) 0, 5 мг/мл, е) 1 мг/мл.

В результате проведения эксперимента было установлено, что предельная концентрация модельного соединения для данного штамма находится в диапазоне 0, 1 – 0, 5 мг/мл. Для уточнения предельного значения концентрации модельного соединения был проведен дополнительный эксперимент.

Для проведения эксперимента были выбраны следующие исходные концентрации модельного соединения: 0, 15 мг/мл, 0, 2 мг/мл, 0, 25 мг/мл, 0, 3 мг/мл, 0, 35 мг/мл, 0, 4 мг/мл и 0, 45 мг/мл.

Процесс осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750 мл в течение суток на круговой качалке при температуре 32º С. В колбы вносили 10 мл посевного материала III пассажа (3 суток роста), 140 мл 0, 1М раствора цитрат-фосфатного буфера (рН 4, 5) и соответствующее количество красителя Methyl Orange для достижения заданных концентраций. Общий объем раствора в каждой колбе составил 150 мл. В контрольные колбы вносили посевной материал и 0, 1М раствор цитрат-фосфатного буфера в заданных соотношениях.

Через сутки после начала эксперимента из каждой колбы был сделан высев на чашки Петри с агаризованным суслом в количестве 1 мл раствора, содержащего биомассу гриба. Осмотр чашек Петри производили через трое суток после высева. Результаты проведения эксперимента представлены на рис. 12.

а) б)

в) г)

д) е)

ж) з)

Рисунок – 12. Высев на чашки Петри из колб, содержащих раствор с концентрацией красителя: а) 0, 15 мг/мл, б) 0, 2 мг/мл, в) 0, 25 мг/мл, г) 0, 3 мг/мл, д) 0, 35 мг/мл, е) 0, 4 мг/мл, ж) 0, 45 мг/мл з) контроль

При концентрации красителя 0, 15 мг/мл и 0, 2 мг/мл площадь обрастания мицелием гриба на третьи сутки роста составила около 80%, при концентрации модельного соединения 0, 25 мг/мл – 50%, при 0, 3 мг/мл – 45%, при 0, 35 мг/мл – 25%. При концентрации красителя 0, 4 мг/мл рост культуры на поверхности агаризованного сусла отмечен не был. При концентрации 0, 45мг/мл площадь обрастания мицелием гриба на третьи сутки роста составила около 20%.

Таким образом, в результате проведения эксперимента установлено, что концентрация красителя 0, 5 мг/мл и выше является летальной для клеток продуцента. Жизнеспособного мицелия в этом случае через 1 сутки экспозиции не остается. При концентрации менее 0, 1 мг/мл жизнеспособность клеток продуцента сохраняется полностью. В диапазоне концентраций 0, 15-0, 45 мг/мл происходит постепенное снижение жизнеспособности мицелия.

На основании полученных результатов была выбрана рабочая концентрация красителя, которая составила 0, 15 мг/мл. Данное значение концентрации модельного соединения соответствует значениям, приведенным в литературных источниках [Rodrí guez Couto S. et al., 2004].