Студопедия

Главная страница Случайная страница

Разделы сайта

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника






  • Проточная цитометрия






    - метод количественного анализа клеток в потоке несущей жидкости с

    использованием проточных цитометров.

     

    Основные принципы метода:

    1. из ткани получают клеточную суспензию, состоящую из отдельных

    клеток

    2. клетки обрабатывают веществами, количественно связывающимися с

    определенными клеточными структурами:

    1. антитела – на белки в клеточной поверхности

    2. ДНК-зонды

    3. РНК-зонды и т.д.

    3. использование флуоресцентной метки, присоединяемой к получаемому

    комплексу

    4. выстраивание клеток в потоке жидкости в один ряд, в одну линию

    5. возбуждение флуоресцентных меток на клетках энергией лазера

    6. измерение интенсивности люминесценции метки ФЭУ

    7. обработка полученных результатов на ЭВМ

    8. результаты исследований представлены в виде гистограмм распреде-

    ления и вариационных рядов цифровых значений

     

     

    Варианты:

    1. количественная гистохимия

    - измерение количества веществ в клетке с помощью

    проведения химических реакций

    - пример – ДНК-цитометрия

    2. иммунофенотипирование

    - выявление комплекса антиген-антитело

     

     

    ДНК-цитометрия

    - изучение количества ДНК в ядрах клеток

    Задачи:

    1. оценка уровня активности пролиферативных процессов в ткани

    2. распределение ядер клеток по плоидности

    3. определение временных параметров клеточного цикла

    4. выявление состояний анэуплоидии – отличающегося от нормального содержание ДНК

     

    Окраска:

    Люминесцентный краситель в реакции по Фельгену

     

    Результаты исследования:

    В виде ДНК-гистограмм - распределение изучаемых клеток по содержанию в их ядрах ДНК.

    Три группы клеток:

    1. диплоидные - содержание ДНК - 2с (хромосом – 2n)

    2. промежуточные - 2с-4с

    3. тетраплоидные - 4с

     

    Т.о., клетки с определенным содержанием ДНК распределяются по периодам клеточного цикла следующим образом:

    2с - характеризуют количество клеток в Go и G1 периодах

    2с-4с - количество клеток в синтетическом периоде

    4с - количество клеток в G2 и М-периодах цикла

     

    Расчет величины пролиферативного пула клеток:

    Клетки:

    1. синтетическом,

    2. премитотическом

    3. митотическом периодах цикла

    - чем выше его величина – тем выше скорость обновления ткани

    наименьшая (стремиться к нулю) - в нейронах

    наибольшая - гемопоэтическая и эпителий слизистой

    пищеварительной трубки (до 50%)

     

    Временные параметры митотического цикла:

    - время прохждения периодов цикла

    G1 – период - 3-10 часов

    S - период - 7-10 часов

    G2 – период - 2-3 часа

    М- период - около 1 часа

    Gо – период

    А. всю клеточную жизнь - нейроны

    Б. несколько часов - стволовые клетки

     






    © 2023 :: MyLektsii.ru :: Мои Лекции
    Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав.
    Копирование текстов разрешено только с указанием индексируемой ссылки на источник.