Задание 4. Количественное определение флавоноидов в растительном сырье

Определите количественное содержание флавоноидов в траве горца птичьего (спорыша) (ГФ ХI т. 2 ст. 56) или количество антоцианов в цветках василька синего. Запишите кратко методику определения, рассчитайте содержание действующих веществ и сделайте заключение о соответствии образца сырья требованиям НД.

Методика количественного определения флавоноидов

в траве спорыша

1. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 1 мм.

2. Около 1 г сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70 % спирта, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут.

3. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды и фильтруют содержимое через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. (* для полного извлечения флавоноидов экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше способом, полученные извлечении фильтруют в ту же мерную колбу через тот же фильтр).

4. Фильтр смывают 70% спиртом и доводят объем фильтрата тем же спиртом до метки. Полученный раствор будет иметь название «раствор А».

в цветках василька синего

1. Измельчите аналитическую пробу сырья до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

2. Около 0, 3 г (точная навеска) измельченного сырья поместите в колбу вместимостью 250 мл, прибавьте 100 мл 1% раствора хлористоводородной кислоты и нагрейте колбу с обратным холодильником на водяной бане в течение 15 минут.

3. Извлечение отфильтруйте через вату в мерную колбу объемом 250 мл (* для полного извлечения антоцианов экстракцию повторяют еще раза указанным выше способом, полученное извлечение фильтруют в ту же мерную колбу через тот же фильтр).

4. Сырье на фильтре промойте 40 мл 1 % раствора хлористоводородной кислоты. После охлаждения фильтрата доведите объем извлечения до метки.

5. Полученное извлечение отфильтруйте через бумажный фильтр, отбросив первые 10 мл фильтрата, и измерьте оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 510 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используйте 1 % раствор хлористоводородной кислоты.

6. Вычислите содержание суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3, 5-дигликозид в абсолютно сухом сырье в процентах по формуле:

, где

D – оптическая плотность исследуемого раствора;

453 – удельный показатель поглощения цианидин-3, 5-дигликозид в 1 % растворе хлористоводородной кислоты;

m – масса сырья в граммах;

W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Приведите методику получения извлечения из сырья для проведения качественных реакций.

2. Приведите методики качественных реакций для флавоноидов. Какая реакция является наиболее специфической?

3. Охарактеризуйте сущность цианидиновой реакции. Для чего при проведении цианидиновой реакции делают контрольную пробу?

4. Расскажите о хроматографическом исследовании флавоноидов.

5. Какую флуоресценцию развивают флавоноиды в УФ-свете?

6. Какие методы используются для количественного определения флавоноидов в ЛРС?

7. Назовите основные этапы количественного определения флавоноидов в траве спорыша.

8. Дайте определение понятия «флавоноиды».

9. Что лежит в основе классификации флавоноидов? Приведите классификацию флавоноидов.

10. Напишите формулы следующих соединений: флавона, апигенина, лютеолина, изофлавона, ононина, флаванола, кемпферола, гиперозида, кверцетина, рутина, флавонона, нарингенина, ликвиритина, флаванонола, аромадендрина халкона, аурона, катехина, лейкоцианидина, антоцианидина.

11. Когда и кем началось изучение флавоноидов? Какой флавоноид был выделен впервые? Какое растение послужило источником?

12. Кто впервые установил строение рутина?

13. В каких органах растений в основном накапливаются флавоноиды? Укажите факторы, влияющие на накопление флавоноидов?

14. Охарактеризуйте физико-химические свойства флавоноидов.

15. Расскажите о методах выделения, очистки и разделения флавоноидов на индивидуальные вещества.