Анализ проб на проточном цитометре

Принципы проточной цитометрии весьма просты. Клетки или ядра поодиночке пересекают сфокусированный световой пучок, обычно лазерный. Свет определенной длины возбуждает молекулы флуоресцирующих красителей, связанных с различными клеточными компонентами, при этом при этом может происходить одновременное возбуждение нескольких разных красителей, что позволяет оценить сразу несколько клеточных параметров. Свет, испускаемый красителями, собирают с помощью системы линз и зеркал и разлагают на компоненты. Световые сигналы детектируют, преобразуют в электрические импульсы и далее в форму, удобную для компьютерной обработки и хранения информации.

Анализ проб проводят с учетом правил проточной цитометрии.

Первая гистограмма (FSxSS) предназначена для выделения области лимфоцитов. Оно проводится по соотношению размера клеток (FS) и ее гранулярности (SS).

Вторая гистограмма (Main) необходима для исключения дебриса (мусора).

На третьей гистограмме выделяют область клеток, окрашенных ДНК-тропным красителем PI и красителем FITS, конъюгированным с антителами против белка Ki-67. Все клетки, попадающие в эту область, считаются как Ki-67-положительные.

Заключение

Ионизирующие излучение индуцируют комплекс цитогенетических, биохимических и биофизических изменений в клетках организма животных и человека, в том числе изменяет состояние клеточных защитных механизмов: систем антиоксидатной защиты, систем репарации и клеточного цикла. Одним из основных механизмов радиационной защиты клетки, направленных на предотвращение деления клеток с повреждениями ДНК, является блок клеточного цикла. В случае нарушения этого защитного механизма повреждения ДНК, возникающие при длительном облучении, могут проявляться в виде соматических мутаций, что в конечном счете, может привести к продукции пула дефектных, структурно и функционально неполноценных клеток.

Исследование клеточного цикла у людей, подвергшихся низкоинтенсивному хроническому радиационному воздействию, позволяет оценить пролиферативную активность и клеточный цикл лимфоцитов периферической крови как модели гемопоэтической клетки красного костного мозга, в отдаленные сроки после радиационного воздействия. Особенно актуальна оценка данных параметров в период, когда большая часть облученных людей достигла пожилого возраста, когда происходит снижение адаптационных резервов, ослабление систем контроля клеточного цикла и репарации, а также спонтанное увеличение частоты соматических мутаций.

Список использованной литературы

1. Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов С.Л. Молекулярная биология: Учебное пособие для студентов медицинских вузов. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. – С. 405-412, 439-443

2. Коггл Дж. Биологические эффекты радиации. Пер.с англ. – М.: Энергоатомиздат, 1986. – С. 46, 57-58

3. Бондарева В.А., Шпонька И.С. Значение прогностических маркеров опухолевой прогрессии Ki-67 и р53 в опухолях молочной железы // Морфологiя. 2007. - Т. 1. - №1. - С. 40

4. Копнин Б.П. Опухолевые супрессоры и мутаторные гены. В кн: Канцерогенез. / Под ред ДГ Заридзе / Москва: Медицина, 2004. – С.125 –156.

5. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия. 2000. – С.5-33.

6. Антонеева И.И., Петров С.Б. Маркеры апоптоза и пролиферации опухолевых клеток в динамике прогрессирования рака яичника. Онкология. 2008. - Т. 10. - №2. - С. 235

7. Маркина Т.Н., Веремеева Г.А., Аклеев А.В. Пролиферация и задержка клеточного цикла лимфоцитов периферической крови человека в отдаленные сроки после хронического радиационного воздействия // Хроническое радиационное воздействие: эффекты малых доз. Тезисы докладов IV международной конференции 9-11 ноября 2010 года, г. Челябинск, Россия

8. Хлебникова А.Н., Селезнева Е.В., Бобров М.А. Экспрессия маркера пролиферации Ki-67 и структурного протеина клеточной адгезии Е-кадхерина при актиническом кератозе // Современные аспекты дерматовенерологии. Тезисы докладов II научно-практичесой конференции 2-3 декабря 2010 года, г. Москва, Россия

9. Ian R. Kill. Localisation of the Ki-67 antigen within the nucleolus. Evidence for a fibrillarin-deficient region of the dense fibrillar component // Journal of Cell Science. 1996. – Р.1253