Выполнение обучающих заданий. Опыт № 1* Воспроизведение и демонстрация анафилактического шока у морской свинки

Опыт № 1* Воспроизведение и демонстрация анафилактического шока у морской свинки

Предварительно сенсибилизированной морской свинке (введением 0, 1 мл нормальной лошадиной сыворотки за 14 дней до опыта) ввести разрешающую дозу (0, 5–1, 0 мл) лошадиной сыворотки в полость сердца или внутривенно (в ушную или бедренную вену). Наблюдают за развитием анафилактического шока. Каждые 5 минут отмечают изменения со стороны дыхания, измеряют ректальную температуру и следят за появлением беспокойства, судорог, непроизвольного мочеиспускания, дефекации. Результаты наблюдений записывают в таблицу 2.

Таблица 2.

В случае летального исхода произвести вскрытие грудной клетки и сделать обзор органов дыхания (наличие симптома Ауэр-Льюиса). Результаты записать в протокол, ответить на твопросы и сделать выводы.

1. К какому типу аллергических реакций по классификации Джилла-Кумбса относится анафилактический шок?

2. Какую стадию аллергии вы наблюдали? Объясните механизм возникших нарушений.

3. Какова непосредственная причина смерти в случае летального исхода? Объясните механизм возникновения «шокового легкого».

Опыт № 2* Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток

Сенсибилизированную лошадиной сывороткой белую крысу (0, 5 мл через день 3-х кратно) усыпить до 3-ей стадии эфирного наркоза. Положить ее на препаровальный столик брюшком кверху, ввести внутрибрюшинно 10 мл физиологического раствора, подогретого до 37º С. В течение 1-2 минут массировать пальцами брюшную стенку для получения перитонеального смыва.

Ножницами вскрыть брюшную полость по средней линии живота (длина разреза 3-3, 5 см). Взять химический стаканчик, ополоснуть его рабочим раствором гепарина (1: 1000). Перевернуть крысу над стаканчиком брюшком вниз для того, чтобы перитонеальный смыв стекал в стаканчик по петлям кишки.

Полученную взвесь отцентрифугировать и осторожно удалить надосадочную жидкость. После взятия перитонеального смыва ушить послойно брюшную стенку крысы.

На три предметных стекла, окрашенных нейтральным красным, нанести по одной капле центрифугата с помощью глазной пипетки.

На 1-ое стекло добавить по одной капле сенсибилизированной сыворотки и аллергена (лошадиную сыворотку) и осторожно перемешать; на 2-ое стекло – по одной капле сенсибилизированной сыворотки и физиологического раствора (контроль сыворотки); на 3-е стекло – по одной капле аллергена и физиологического раствора (контроль аллергена). Накрыть капли покровными стеклами, углы которых заранее смазаны вазелином. Инкубировать препараты в термостате в течение 15 минут.

Микроскопия препаратов

Используя объектив 8 и окуляр 7, произвести обзорную микроскопию обоих контролей. Среди неокрашенных лейкоцитов найти окрашенные в сиреневый цвет тучные клетки. Выбрать поле зрения с относительно большим содержанием тучных клеток. Сменить объектив 8 на объектив 40. В установленном поле зрения найти интактные и дегранулированные тучные клетки.

Характеристика интактных клеток. Диаметр в 1, 5 раза больше диаметра лейкоцитов. Правильная округлая или овальная форма, в цитоплазме сиренево-красные гранулы, на месте ядра просветление. Оболочка непрерывная, четко контурируется при вращении винта микроскопа.

Характеристика дегранулированных клеток. Неровный контур, цитоплазма вакуолизирована, на внешнем контуре клетки можно видеть стому, через которую гранулы изливают содержимое наружу.

Подсчитать процент дегранулированных и интактных тучных клеток в каждой капле. Для этого передвигать препарат по ломаной линии до тех пор, пока общее число тучных клеток не будет равно 50. Отметить, какое число из них составляют дегранулированные клетки. Полученные данные сравнить.

Результаты записать в протокол и сделать выводы, опираясь на поставленные вопросы:

1. Каковы механизмы специфической дегрануляции тучных клеток? Чем, по-вашему, она вызвана?

2. Какие первичные медиаторы (предсуществующие и вновь синтезированные) выделяются при дегрануляции тучных клеток, какую роль они играют в развитии аллергии? Какова роль вторичных медиаторов аллергии?

3. Возможно ли развитие дегрануляции тучных клеток у несенсибилизированных животных? Если да, то в каких случаях, чем они отличаются от анафилаксии?