Практическая работа. I. Определение гемоглобина методом Сали. Цель опыта: Научиться определять содержание гемо­глобина колориметрическим способом.

I. Определение гемоглобина методом Сали. Цель опыта: Научиться определять содержание гемо­глобина колориметрическим способом.

Гематиновый метод Сали основан на образовании устойчи­вого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемогло­бина с НС1.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки за­паяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина; средняя – градуирована. Она предназначена для прове­дения исследования. Стандартный раствор солянокислого гематина по цвету соответствует 167 г/л гемоглобина.

Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но не­достаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка при определении гемоглобина ±30%. Поэтому в настоящее время в клинике этот метод должен быть заменен более точным.

Ход работы: в среднюю пробирку наливают 0, 1 Н р-р НСl до нижней метки. Пипеткой берут 20 мм³ кровиизпальца до метки, обтирают ее кончик ватой и выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался не­окрашенным. Не вынимая пипетку, споласкивают ее кисло­той. После этого содержимое пробирки перемешивают и ставят в штатив на 5–10 мин. Это время необходимо для полного превращения Нb в солянокислый гематин. Затем к содер­жимому пробирки добавляют по каплям дистил. воду до тех пор, пока цвет полученного р-ра не будет совершенно одина­ков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешива­ют стеклянной палочкой).

Цифра на уровне верхней границы полученного р-ра, пока­зывает абсолютное содержание Hb в испытуемой крови, вы­раженное в г %. Значение следует перевести в г/л, т. е. ум­ножить на 10.

2. Измерение количества Hb эритрогемометром. Цель опыта: Ознакомиться с определением гемоглобина эритрогемометром.

Определение количества Hb основано на фотоэлектрическом измерении степени поглощения света р-ром Hb. Определение ведется в зеленой части спектра.

Ход работы: пипеткой налить 5 мм³ 0, 1% р-ра уксус­ной кислоты в чистую сухую пробирку и сюда же ввести 40, мкл исследуемой крови, взятой пипеткой для Hb. Содержимое пробирки перемешать без встряхивания. Затем содержимое пробирки налить в кювету с отметкой «Г». Вращая ручку диска эритрогемометра, добиться возвращения стрелки миллиампер­метра на «0» и на шкале «Hb» посмотреть содержание Hb в г%.

3. Вычисление цветного показателя. Цель опыта: научиться способам расчета цветного по­казателя.

Цветной показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. В 1 мкл крови – 167-10^-6 г Hb, следовательно Hb в одном эритроците равно г или 33 пг. Величину 33 пг, составляющую норму содержанияHb в 1 эрит­роците, принимают за единицу и обозначают как цв. пок. Практически цв. пок. вычисляют по следующей формуле:

где Hbх – найденный Hb в г%.

Существует и другая формула расчета цв. пок,

, где

Hbх – найденный Hb в г%,

Hb норм. – условно нормальное содержание Hb (16, 67) в г%,

эр. х – найденное количество эритроцитов,

норм. эр. – условно нормальное кол-во эритроцитов (5 млн.)

При патологических состояниях цв. п. может быть больше 1 (гиперхромия) или ниже 0, 8 (гипохромия).

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

4. Фракции гемоглобина Р, гемоглобина А.

5. Буферные свойства гемоглобина.

6. Наследственные аномалии гемоглобина.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Вследствие большой физической нагрузки некоторые груп­пы мышц у спортсменов сильно сокращены, что ведет к суживанию капилляров и прекращению тока крови по ним. Как осуществляется в таком случае снабжение мышечных волокон кислородом?

2. На ночь печь в доме жарко затопили, рано закрыли заслонку дымохода. Утром всю семью нашли мертвой. С чем это связано?

3. В исследуемой крови 6-месячного ребенка содержится 120 г/л Нв. Является ли это нормой?

4. В крови 0, 1% СО. Какое соединение дает гемоглобин с этим газом? Сколько гемоглобина переходит в это соединение? Воз­можны ли при таком состоянии обратимые явления.

5. Подчеркните, какой из видов гемоглобина обладает наиболь­шим сродством к кислороду: НвР; НвР; НвА?

6. Определено, что количество эритроцитов – 4 500 000, Нв 143 г/л; эритроцитов – 6 520 000, Нв – 151 г/л. Вычислите цветной показатель.

7. Цветной показатель равен 1, 3. Когда это физиологично?

8. Почему определение гемоглобина методом Сали недостаточ­но точно?

9. Что будет, если соляной кислоты в пробирку гемометра Сали Вы нальете больше, чем положено? Меньше, чем положено?

10. Что будет, если носик пипетки, перед внесением крови в раствор соляной кислоты в пробирку гемометра, Вы забуде­те обтереть ватой?

Сборник «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии».

Раздел «Физиология крови». Задачи № 34-56.