Ж - Картина ПКФМС эпителий – норма.

Пациентка обратилась в ГУ НИИГБ РАМН спустя полтора месяца после операции ФЭ с имплантацией ИОЛ с жалобами на чувство инородного тела и «затуманиванивание зрения» на правом глазу. В течение 1, 5 месяца пациенка получала консервативное лечение (инстилляции глюкозы, солкосерила, тобрадекса и индоколлира, с/к инъекции дексаметазона, солкосерила), без эффекта.

При осмотре роговицы правого глаза определялся нежный диффузный отек эпителия и стромы, плоские обширые буллы в центре и на периферии. Острота зрения на OD составляла 0.6. При зеркальной микроскопии эндотелия роговицы OD ПЭК не определялась ввиду отека. На парном глазу отмечены явления ЭЭД Фукса. Пахиметрия на OD составила 715 мкм в центре. 10.02.10 и 17.02.10 в операционной было выполнено 2 сеанса ПКТ. После чего отмечали постепенную резорбцию отека стромы роговицы, острота зрения повысилась на 0, 2 и составила 0, 8 при выписке.

Вследствие повышения прозрачности роговицы уже через месяц после ПКТ стала возможна визуализация эндотелия с помощью ПКФМС OD: отмечается выраженный полиморфизм ЭК, ПЭК 648, 5 кл/мм, повышенная рефлективность кератоцитов, прозрачность межклеточного матрикса снижена, особенно в передних слоях стромы. Эпителий – резко повышена рефлективность межклеточных границ базального слоя. Пахиметрия OD 621 мкм в центре.

Через 3 месяца после ПКТ острота зрения OD составила 1, 0.

Спустя 3 года пахиметрия роговицы OD составляет 568 мкм в центре. ПЭК OD 864 кл/мм, vis OD – 1, 0. ПКФМС OD: «Визуализируются ЭК с двойными ядрами. Задняя и средняя строма без особенностей, в передних стромальных слоях – умеренный отек экстрацеллюлярного матрикса, базальный слой эпителия сохранен, в эпителии единичные десквамированные клетки поверхностного слоя». В течение 3 лет наблюдения состояние роговицы и острота зрения стабильны.

Заключение

Персонализированная клеточная терапия с использованием аутологичных клеточных продуктов, открывает новые возможности для эффективного лечения ранней ПБК, развившейся в первые месяцы после микрхирургических операций и решает ряд имеющихся на сегодняшний день проблем (безопасный и экономичный способ получения клеточного материала, исключение возможности иммунологического конфликта и др.).

Исследования клеточного и цитокинового состава клеточного препарата для проведения ПКТ позвололи сформулировать возможные фундаментальные механизмы терапевтического действия ПКТ: провоспалительные цитокины, вкупе с ИЛ-8, ослабляют межклеточные контакты, чем, вероятно, снимают контактное ингибирование митоза, позволяя эндотелиоцитам поделиться или мигрировать и закрыть зону дефекта; антиапоптотическому эффекту способствует наличие факторов роста, концентрация которых в водянистой влаге в норме снижена, они, кроме того, усиливают синтез внеклеточного матрикса, что стабилизирует барьерную функцию эндотелия, о чём также свидетельствует наличие полиплоидных ядер в эндотелии роговиц у ряда пациентов.

Разработанный нами метод проведения ПКТ, позволяющий получить из небольшого объёма периферической крови пациента клеточный препарат, представляющий из себя взвесь аутологичных лейкоцитов в насыщенной цитокинами (процессированной) сыворотке, прошел успешную клиническую апробацию. Полученные результаты свидетельствуют о его терапевтической эффективности и безопасности в офтальмологической клинике для лечения ранней ПБК. Выраженный терапевтический эффект достигнут в 44, 2% случаев, при этом прирост остроты зрения составил 0, 49±0, 27. Достигнуто снижение толщины роговицы с 801±112 мкм до 582±55 мкм. О нормализации структуры роговицы после ПКТ также свидетельствуют данные ПКФМС.

Персонализированная клеточная терапия в настоящее время является единственным эффективным методом лечебного воздействия на клетки поврежденного эндотелия у пациентов с ранней послеоперационной буллезной кератопатией, не требующим трансплантации роговицы.

Список литературы.

1. Аветисов С.Э., Суббот А.М., Антохин А.И., Каcпарова Е.А., Каспаров А.А., Павлюк А.С. Персонализированная клеточная терапия в офтальмологии. I. Метод получения и цитофенотип аутологичного клеточного продукта // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2011. Т. 6. № 2. С. 38-42.

2. Аветисов С.Э., Суббот А.М., Антохин А.И., Каспарова Е.А., Каспаров А.А., Павлюк А.С. Персонализированная клеточная терапия в офтальмологии (II): цитокиновый профиль аутогенного клеточного продукта. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2012 Март; VII(1): 49-53

3. Ботабекова Т.К., Г.В. Федотовских, В.Ю. Кобцева, Д.Б. Абрахимова//Воспалительный компонент эндотелиально-эпителиальной дистрофии по данным патоморфологического исследования. В сб. науч.-практ. конф. «Современные методы диагностики и лечения заболеваний роговицы и склеры», М. 2007, стр. 41-45

4. Бродский В. Я., Урываева И. В. Клеточная полиплоидия. Пролиферация и дифференцировка. М.: Наука, 1981, 276c.

5. Бурунова В.В. Проблемы стандартизации при получении клеточных культур мезенхимального происхождения: экспериментальный и теоретический анализ: автореферат диссертации к.б.н. - М., 2011. - 25 с.

6. Зиангирова Г.Г., Каспаров А.А., Смирнова Н.Б., Горгиладзе Л.Т. Морфологический анализ роговичных дисков при эпителиально-эндотелиальной дистрофии, связанной с афакией и артифакией. Вестник офтальмологии – 1990, том 106, №3, стр.39-41.

7. Каспаров А.А. Офтальмогерпес. Медицина. Москва, 1990, стр. 80-106.

8. Каспарова А.А., Каспарова Евг.А., Павлюк А.С. Локальная экспресс-аутоцитокинотерапия (комплекс цитокинов) в лечениии вирусных и невирусных поражений глаз. Вестник офтальмологии., 2004, том 120, №1, стр. 29-32.

9. Каспарова Евг.А., Бородина Н.В., Суббот А.М. Прижизненная конфокальная микроскопия для оценки эффективности персонализированной клеточной терапии при лечении ранней послеоперационной буллезной кератопатии. Вестник офтальмологии, 2012, том 128, №1, стр. 26-33, г.

10. Каспарова Евг.А., Суббот А.М., Калинина Д.Б. Пролиферативный потенциал эндотелия роговицы человека. Вестник офтальмологии №3, стр. __

11. Рапуано К. Дж., Хенг В. Дж. «Роговица» Атлас по офтальмологии, изд. Геотар-Медия, 2010, стр 246; стр.192, стр. 313.

12. Федоров С.Н., Ронкина Т.И., Явишева Т.М. Эндотелий роговицы человека. Москва: МНТК “Микрохирургия глаза, ” 1993. 126 С.

13. Хабриев Р.У., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Долгина Е.Н. // Метод персонифицированой иммунотерапии, медицинская технология, Москва, 2011 год.

14. Bates A.K., Cheng H. Bullous keratopathy: a study of endothelial cell morphology in patients undergoing cataract surgery // Br. J. Ophtalmol. – 1988.- Vol. 72, №6. – P. 409-412.

15. Bednarz J, Thalmann-Goetsch A, Richard G, Engelmann K. Influence of vascular endothelial growth factor on bovine corneal endothelial cells in a wound-healing model // Ger J Ophthalmol. 1996. Т. 5. № 3. P. 127-131.

16. Claesson, Margareta, W John Armitage, and Ulf Stenevi. “Corneal oedema after cataract surgery: predisposing factors and corneal graft outcome.” Acta Ophthalmologica 87, no. 2 (March 2009): 154-159.

17. Feldman ST, Gately D, Schö nthal A, Feramisco JR. Fos expression and growth regulation in bovine corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1992 Nov; 33(12): 3307–3314.

18. Gnecchi M, Zhang Z, Ni A, Dzau VJ. Paracrine mechanisms in adult stem cell signaling and therapy // Circ. Res. 2008. Т. 103. № 11. P. 1204-1219.

19. Hoppenreijs VP, Pels E, Vrensen GF, Treffers WF Effects of platelet-derived growth factor on endothelial wound healing of human corneas // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. Т. 35. № 1. P. 150-161.

20. Joyce N.C., Harris D.L., Mello D.M. Mechanisms of mitotic inhibition in corneal endothelium: contact inhibition and TGF-beta2 // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. Т. 43. № 7. P. 2152-2159.

21. Joyce NC. Proliferative capacity of the corneal endothelium. Prog Retin Eye Res. 2003 May; 22(3): 359-89.

22. Maltais S, Tremblay JP, Perrault LP, Ly HQ. The paracrine effect: pivotal mechanism in cell-based cardiac repair // J Cardiovasc Transl Res. 2010. Т. 3. № 6. P. 652-662.

23. Nguyen V, Schonthal A, Feldman ST. Expression of c-jun proto-oncogene in corneal endothelium. Exp Eye Res. 1994 Sep; 59(3): 335-41.

24. Parikh, Chirag, Brian D Sippy, Daniel F Martin, and Henry F Edelhauser. “Effects of enzymatic sterilization detergents on the corneal endothelium.” Archives of Ophthalmology 120, no. 2 (February 2002): 165-172

25. Patel SA, King CC, Lim PK, Habiba U, Dave M, Porecha R, Rameshwar P. Personalizing Stem Cell Research and Therapy: The Arduous Road Ahead or Missed Opportunity? Curr Pharmacogenomics Person Med. 2010 Mar 1; 8(1): 25-36.

26. Raphael, B, T Lange, T O Wood, and B J McLaughlin. “Growth of human corneal endothelium on altered Descemetʼ s membrane.” Cornea 11, no. 3 (May 1992): 242-249.

27. Rieck PW, Gigon M, Jaroszewski J, Pleyer U, Hartmann C. Increased endothelial survival of organ-cultured corneas stored in FGF-2-supplemented serum-free medium // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2003. Т. 44. № 9. P. 3826-3832.

28. Saika S. Yin and yang in cytokine regulation of corneal wound healing: roles of TNF-alpha // Cornea. 2007. Т. 26. № 9 Suppl 1. P. S70-74.

29. Song J.-S., Lee J.G., Kay E.P. Induction of FGF-2 synthesis by IL-1beta in aqueous humor through P13-kinase and p38 in rabbit corneal endothelium // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2010. Т. 51. № 2. P. 822-829.

30. Sugiyama T, Hoshino K, Saito M, et al. Immunoadjuvant effects of polyadenylic: polyuridylic acids through TLR3 and TLR7. Int Immunol. 2008 Jan; 20(1): 1-9.

31. Szentmá ry, N, B Szende, and I Sü veges. “Epithelial cell, keratocyte, and endothelial cell apoptosis in Fuchsʼ dystrophy and in pseudophakic bullous keratopathy.” European Journal of Ophthalmology 15, no. 1 (February 2005): 17-22

32. Teresa L. Means, Glenn P. Holley, Keiki R. Mehta and Henry F. Edelhauser Corneal Edema from an Intraocular Irrigating Solution Containing Benzalkonium Chloride Cutaneous and Ocular Toxicology 1994, Vol. 13, No. 1, Pages 67-81.

33. Tripathi RC, Borisuth NS, Li J, Tripathi BJ. Growth factors in the aqueous humor and their clinical significance // J. Glaucoma. 1994. Т. 3. № 3. P. 248-258.