Исследование эндотелия роговицы методом прижизненной конфокальной микроскопии (ПКФМС).

Исследование эндотелия роговицы методом ПКФМС (визуализация и подсчет ЭК) у больных с ранней ПБК до проведения ПКТ, как правило, оказывалось невозможным ввиду выраженного отека роговицы. После проведения ПКТ в группе пациентов с выраженным и частичным эффектом отек роговицы резорбировался, прозрачность роговицы восстанавливалась и ПКФМС давал возможность визуализировать структуру роговицы, определить состояние кератоцитов, а также количественные и качественные характеристики эндотелия.

Так, средние значения ПЭК после лечения составили 1080±463.Ядра, визуализируемые в кератоцитах и эндотелии были крупными и гиперрефлективными, что свидетельствует об интенсивно протекающих синтетических процессах.

Многие эндотелиоциты, были полиплоидными (имели по 2 ядра и более). У ряда пациентов полиплоидные ядра сохраняются спустя 3-5 лет после проведения ПКТ. При этом, несмотря на то, что ПЭК у этих больных относительно низкая (760-1229 кл/мм), прозрачность роговицы сохраняется и рецидива отека не наблюдается. При контрольном обследовании парных глаз этих больных методом конфокальной микроскопии, двойных ядер в эндотелиальных клетках не обнаруживается. Этот факт свидетельствует о том, что в результате применения ПКТ, вероятно, в эндотелии реализуются регенеративные процессы, приводящие, в том числе, к незавершенному митозу и, возможно, делению эндотелиальных клеток. По данным В. Я. Бродского и И. В. Урываевой, эндотелию роговицы человека свойственен полиплоидизирующий митоз, в результате которого увеличивается количество ядер и происходит увеличение размеров клеток. Такие клетки сохраняют функциональную активность и обеспечивают нормальные метаболические процессы в монослое эндотелия в условиях возрастной физиологической убыли клеток. Полиплоидизирующий митоз является вариантом регенерации в условиях монослоя, его наличие подтверждает способность эндотелия роговицы к делению [4, 12].

Деление эндотелиоцитов роговицы человека описано в литературе. Стимуляция деления ЭК зафиксирована при ослаблении межклеточных контактов в результате травмы, под воздействием ЭДТА или провоспалительных цитокинов и факторов роста, добавляемых вместо компонентов водянистой влаги передней камеры, а также, при контакте с сывороткой крови. [17, 21, 23, 10].

Все эти факторы присутствуют и в случае применения интраоперационной ПКТ для лечения ПБК – на эндотелии имеется операционный дефект, а в переднюю камеру вводится, замещая собой водянистую влагу, клеточный препарат в аутологичной сыворотке крови, содержащий в своем составе цитокины и факторы роста.