Количественное определение

Количественное определение проводили спектрофотометрическим и перманганатометрическим методами.

Перманганатометрический метод (метод Левенталя в модификации
А.П.Курсанова). Это фармакопейный метод, основан на легкой окисляемости
ДВ перманганатом калия в кислой среде в присутствии индикатора и катализа­тора индигосульфокислоты, которая в точке эквивалентности переходит в иза­тин, и цвет раствора меняется от синего до золотисто-желтого.

Особенности определения, позволяющие оттитровать только макромоле­кулы ДВ: титрование проводится в сильно разбавленных растворах (извлечение разбавляется в 20 раз) при комнатной температуре в кислой среде, перманганат калия добавляется медленно, по каплям, при интенсивном перемешивании.

Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3мм, помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Жидкость охлаждают до комнатной температуры и процеживают около 100 мл в коническую колбу вместимостью 200-250 мл через вату так, чтобы частицы сырья не попали в колбу.

Затем отбирают пипеткой 25 мл полученного извлечения в другую коническую колбу, прибавляли 500 мл воды, 25 мл индигосульфокислоты и тировали при постоянном перемешивании 0, 02 М раствором калия перманганата до золотисто-желтого окрашивания. Параллельно проводили контрольный опыт.

Содержание дубильных веществ (Х) в процентах в пересчете на абсолютное сухое сырье вычисляют по формуле:

Х = (V-V1)* 0.004157* 250* 100* 0100 / m* 25* (100-W)

где V – объем раствора перманганата калия (0, 02 моль/ л), израсходованного на титрование извлечения, в миллилитрах; V1 – объем раствора перманганата калия (0, 02 моль/ л), израсходованного на титрование в контрольном опыте, в миллилитрах; 0, 004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора перманганата калия (0, 02 моль/ л), (в пересчете на танин), в граммах; m – масса сырья в граммах; W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах; 250 – общий объем извлечения в миллилитрах; 25 – объем извлечения, взятого для титрования, в миллилитрах.

Спектрофотометрическое определение. После получения водного извлечения часть его центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. К центрифугату добавляют 2 % водной раствор аммония молибдата, после чего разбавляют водой и оставляют на 15 мин. Интенсивность образовавшейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 420 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Расчет танидов производят по стандартному образцу. В качестве стандартного образца используют ГСО танина. Около 0, 8 г (точная навеска) измельченного до размера частиц 2 мм сырья заливали 100 мл воды и нагрели на кипящей водяной бане в течение 30 мин с последующим 30-минутным отстаивание при комнатной температуре. Полученное извлечение фильтровали через складчатый бумажный фильтр в мерную колбу емкостью 100 мл, доводили водой до метки.

5 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили до метки спиртом этиловым 70%, 2, 5 мл полученного извлечения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%. Измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре «GENESYS 5» в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны от 274, 5 до 277, 5 нм относительно спирта этилового 70%. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандартного образца танина.

Примечание. Приготовление раствора стандартного образца танина. Около 0.0025 г (точная навеска) стандартного образца танина, высушенного до постоянной массы при температуре 100-150 °С, помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили спиртом этиловым 70% до метки, 2, 5 мл полученного разведения помещали в мерную колбу на 25 мл и доводили до метки спиртом этиловым 70%.

Содержание дубильных веществ в пересчете на воздушно-сухое сырье (Х, %) определяли по формуле:

Х = Dx * Mст* 100 * 50 * 25 * 2, 5 * 100 / Dст * Mx * 5 * 2, 5 * 50 * 25

где Мст – масса танина, г; Мх – масса сырья, г; Dст – оптическая плотность раствора стандартного образца танина; Dх – оптическая плотность исследуемого раствора.