Глава 2. Методика работы

Работа велась последовательно и состояла из нескольких этапов, повторяющихся при изучении каждого вида.

2.1. Подготовительный этап.

После проведения морфологического описания собранный материал делился на части, одна из которых шла на изготовление гербария собранных видов и фиксацию материала, другая служила для изготовления временных и постоянных препаратов.

Фиксация материала должна сохранить клеточные оболочки и сделать материал более удобным для резки. Происходит консервация объекта, а также его уплотнение или размягчение в зависимости от компонентов фиксирующей смеси. Для фиксации материала было опробовано три фиксирующие смеси для анатомических исследований.

• смесь спирта с формалином в следующей пропорции:

спирт 96° - 94 мл

формалин - 6 мл

Добавленный в фиксатор формалин является цитоплазматическим фактором, коагулирующим белки, что улучшает конечный результат, давая более полную картину на срезе.

• копенгагенская смесь:

спирт 96° - 13 мл

глицерин - 0, 5 мл

вода - 5 мл

Глицерин, введенный в состав фиксатора, способствует размягчению сильно одревесневших клеточных оболочек, в результате чего консистенция материала становится более однородной и он легче режется.

• смесь, используемая для сильно одревесневших объектов

спирт 70° - 10 мл

воды - 10 мл

глицерин - 10 мл

Изготовление поперечных препаратов рахиса велось по стандартным методикам с использованием в качестве режущего инструмента лезвия.

Объект зажимают в сердцевину бузины или пенопласт. Если объект имеет значительную толщину, то в одной из половинок вырезают ложбинку, в которую и закладывают объект, затем прижимают второй половинкой. У подготовленных таким образом объектов подравнивают поверхность и приступают к изготовлению срезов. В процессе определения растительного материала пользуются как временными, так и постоянными препаратами. При изготовлении временных препаратов срезы по мере их получения быстро переносят препаровальной иглой или кисточкой на заранее приготовленные предметные стекла в каплю воды или воды с глицерином (2: 1) и прикрывают покровным стеклом. Покровное стекло накладывают одним краем на предметное стекло в непосредственной близости к капле реактива, в которой лежит срез, и осторожно опускают на каплю, поддерживая противоположный конец покровного стекла препаровальной иглой. Готовый препарат этикетируют.

Для того чтобы можно было лучше разглядеть детали строения изучаемого объекта, срезы просветлялись глицерином, непосредственно нанесенным на предметное стекло. Изготовляя постоянные препараты, срезы чаще всего заключают в глицерин-желатину.

Глицерин-желатина является традиционной средой для изготовления постоянных препаратов. Обладает хорошим показателем преломления (1, 48), проста в приготовлении. Состав среды: желатин пищевой – 10 г, вода дистиллированная – 60 мл, глицерин чистый – 70 мл, фенол (тимол) – 0, 1 г. Желатин заливают водой и выдерживают 2-3 часа для набухания. Затем наливают глицерин с растворенным в нем фенолом, нагревают на водяной бане и помешивают до образования однородной массы. При этом необходимо избегать попадания в глицерин-желатину пузырьков воздуха. Глицерин-желатину полезно профильтровать при нагревании.

Перед употреблением готовую глицерин-желатину расплавляют, погружая сосуд с ней в водяную баню. Процесс заливки препарата следует проводить по возможности скоро или с подогревом предметного стекла, так как глицерин-желатина быстро застывает на предметном стекле. Подогрев предметного стекла лучше всего производить на водяной бане. Не снимая с бани предметного стекла, на его середину наносят каплю глицерин-желатины, а в нее осторожно вносят с помощью препаровальной иглы срезы. Затем покрывают покровным стеклом, также предварительно подогретым,

Готовые препараты описывались под микроскопом. Общая картина рассматривалась на «малом» увеличении. Положение клеточных элементов и особенностей отдельных клеточных структур и клетки рассматривались на «большом» увеличении. Некоторые параметры клеток измерялись окуляр-микрометром.