Стадия ВР-3. Подготовка посуды

Стадия ВР-1. Подготовка бокса для работ с культурой

Подготовка бокса для проведения микробиологических работ. Бокс – помещение для проведения микробиологических работ, требующих абсолютной стерильности. Для этого в боксе и предбокснике устанавливаются бактерицидные лампы на высоте около 2 м от пола, предназначенные для обеззараживания воздуха и материалов, находящихся там.

Ежедневно бокс подвергается влажной уборке с применением дезинфицирующих средств. Чаще всего используют растворы хлорамина (5%) и моющий раствор (5%). Дезинфицирующим раствором протирают мебель, стены, пол, смачивают коврик при входе в бокс. Поверхности, покрытые жестью, протирают 70% спиртом.

Помещение бокса просушивают, проветривают и вносят в него все необходимые для работы материалы:

- спиртовку с колпачком для тушения;

- банку стеклянную с дезинфицирующим раствором для использованных в работе предметов (пипетки, петли и др.);

- стерильные посевные предметы (пипетки, чашки, колбы);

- спирт для работы;

- вату в закрытой стеклянной банке.

В боксе не должно быть ничего лишнего. Спецодежда (халаты, маски 4-слойные, косынки) находятся в предбокснике и также подвергаются обработке.

После влажной дезинфицирующей уборки в боксе и предбокснике включаются бактерицидные лампы на 1 ч, через 20 мин после выключения ламп бокс готов к работе.

Стерильность в боксе проверяется ежедневно высевом на чашки Петри. Допустимое количество – от 4 до 6 колоний на 1 чашке Петри при 10 мин экспозиции на поверхность плотной питательной среды.

Стадия ВР-2. Изготовление ватно-марлевых пробок

Ватные пробки для пробирок и колб изготавливают вручную. Пробки должны быть достаточно плотными с равномерным распределением волокон ваты. Для приготовления пробки берут кусок ваты, загибают края и складывают ее валиком. Для придания пробке прочности ее прокатывают между ладонями или между ладонью и чистым стеклом, лежащим на столе. Длина пробки для пробирки должна быть около 4 см и входить в нее на 1, 5-2 см. Изготовленные пробки оборачивают марлей и завязывают нитками.

Приготовленные таким образом пробки передают на стадию ВР-3.

Отходы ваты, марли, ниток отправляют в мусоросборник.

Стадия ВР-3. Подготовка посуды

Стадия ВР-3 состоит из операций: замачивания, мойки, сушки и стерилизации посуды.

3.1. Замачивание и мойка посуды.

Посуду, предназначенную для проведения работ по культивированию микроорганизмов и приготовлению питательных сред, тщательно моют.

Новую посуду сначала промывают раствором двухромовокислого калия в серной кислоте, а затем моют в водопроводной воде.

Использованная посуда со стадии ОБО-1 предварительно замачивается в воде на 1-2 ч, а затем моется в 1% растворе моющего средства при температуре (50-60)^оС, споласкивается водопроводной водой.

Использованный раствор двухромовокислого калия, многократно разбавленный водой, сливают в канализацию.

3.2. Сушка посуды.

После мойки посуду сушат при температуре (100±2)^оС.

Для сохранения стерильности посуды, все, подлежащее стерилизации, плотно заворачивают в бумагу – пергамент. Колбы, пробирки и др. посуду перед стерилизацией закрывают ватными пробками и надевают на них бумажные колпачки. Концы пипеток предварительно закрывают ватными пробками и заворачивают в длинные полоски бумаги, шириной 3-4 см. Обмотку начинают с того конца, который опускают в среду. Для предохранения бумаги от разрывов и загрязнения пипетки обертывают еще раз по несколько штук или стерилизуют их в специальных пеналах.

Посуда готова к стерилизации.

3.3. Стерилизация посуды.

Стерилизация посуды сухим жаром производится в сушильных шкафах при температуре 165-170^оС в течение 1 ч или при 150^оС 2 часа. По окончании стерилизации ждут, пока температура в шкафу упадет до 70-100^оС, т.к. при резком охлаждении сильно перегретое стекло может потрескаться.

Простерилизованную посуду передают на стадию ТП-1.