Определение активности щелочной фосфатазы по фосфору.

Принцип метода. Фосфатаза крови расщепляет b-глицерофосфат натрия с освобождением неорганического фосфора. Мерой активности фермента служит количество освободившегося фосфора.

Ход работы. В пробирку с 2, 5 мл глицерофосфатного буфера рН 8, 6 добавляют 0, 5 мл сыворотки и помещают ее в термостат при 37⁰С на 30 мин (опытная проба). В конце инкубации готовят контрольную пробу, в которой смешивают 2, 5 мл буфера и 0, 5 мл сыворотки. Затем в обе пробирки добавляют по три мл 10% р-ра ТХУ и центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. Центрифугат осторожно сливают в чистые пробирки и добавляют к нему по 1 мл 5% р-ра молибдата аммония и 1мл 1% р-ра аскорбиновой кислоты. Через 15 мин колориметрируют опытную пробу против контроля при красном светофильтре в кювете толщиной 1 см. Количество неорганического фосфора определяют по калибровочному графику. Активность фосфатазы выражают в мг неорганического фосфора, образующегося под действием фермента в 100 мл сыворотки (единицы Боданского). Для этого используют формулу: А=С*200, где А – активность фосфатазы в единицах Боданского, С – концентрация фосфора, определенная по графику, 200 – коэффициент пересчета на 100 мл сыворотки.

Норма активности щелочной фосфатазы у детей – 5-15 единиц, у взрослых – 2-5 единиц.

Диагностическое значение определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Увеличение активности щелочной фосфатазы является одним из признаков рахита, причем степень гиперфосфатаземии зависит от тяжести заболевания. Значительное увеличение активности щелочной фосфатазы наблюдается при остеомаляции, при деформирующей остеодистрофии и при первичном гиперпаратиреоидизме. При механических желтухах активность фермента превышает нормальное значение в 5-10 раз; умеренная гиперфосфатаземия является одним из ранних признаков метастазов злокачественных новообразований. Резкая гиперфосфатаземия наблюдается при злокачественных костных новообразованиях остеобластического типа, но отсутствует при доброкачественных опухолях и новообразованиях остеолитического типа.

Вопросы к защите лабораторной работы:

1. На чем основано определение содержания кальция в сыворотке крови?

2. Зачем нужно определять содержание кальция в крови?

3. Почему диапазон колебаний концентрации кальция в крови очень мал?

4. Каково содержание кальция в крови при рахите?

5. Как изменится содержание кальция в крови при снижении секреции паратгормона?

6. Какие функции в организме выполняет фосфор?

7. Принцип метода определения концентрации фосфора в сыворотке крови.

8. Как регулируется содержание фосфора в организме?

9. Что такое щелочная фосфатаза?

10. Принцип метода определения щелочной фосфатазы.

11. Каково диагностическое значение определения щелочной фосфатазы?

5.4. Итоговый контроль знаний:

- вопросы по теме занятия:

4. Каково содержание воды в организме человека в зависимости от возраста?

5. Перечислите функции воды в организме.

6. Что такое водный баланс?

7. Назовите источники воды.

8. Каким образом вода выводится из организма?

9. Расскажите о регуляции воды антидиуретическим гормоном.

10. Перечислите функции минеральных веществ в организме.

11. Назовите функции натрия в организме.

12. Каковы причины гипо- и гипернатриемии? Каковы следствия этих состояний?

13. Перечислите функции калия в организме. К чему приводят нарушения в обмене калия?

14. Перечислите функции хлора в организме.

15. Расскажите о регуляции минерального обмена альдостероном.

16. Расскажите о регуляции минерального обмена гормонами предсердий.

17. Какие функции в организме выполняет кальций?

18. Расскажите о регуляции обмена кальция паратгормоном, витамином Д и тиреокальцитонином.

19. Какую роль в организме играют фосфор, магний, марганец, железо, селен и медь?

- ситуационные задачи:

1. Суточный объем мочи 4, 5 л, относительная плотность 1004 (норма 1020). Глюкоза в моче не обнаружена, кетоновые тела отсутствуют. Какому заболеванию могут соответствовать результаты анализов? Обоснуйте ответ, для этого:

а) назовите гормон, синтез и секреция которого нарушены в этом случае;

б) опишите механизмы действия этого гормона на клетки-мишени.

2. У больного при обследовании обнаружены гипертензия, пониженная концентрация калия в крови. Активность ренина снижена, уровень альдостерона в плазме крови выше нормы. При компьютерной томографии обнаружили опухоль левого надпочечника. Можно ли больному рекомендовать для лечения гипертонии препараты – ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АПФ)?

3. Известно, что эстрогены оказывают анаболическое действие на кости и хрящи. У женщин в менопаузе повышается вероятность переломов костей. Почему это происходит?

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ КОНЕЧНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. ОБМЕН ФОСФОРА РЕГУЛИРУЕТСЯ ПАРАЛЛЕЛЬНО С ОБМЕНОМ

1) фтора

2) натрия

3) кальция

4) хлора

2. ДЛЯ РЕГУЛЯЦИИ КАЛЬЦИЯ И ФОСФОРА В КРОВИ ОСОБЕННО ВАЖНЫ ВИТАМИНЫ

1) Д

2) К

3) В₁₂

4) С

3. УСИЛЕННОЕ ПОТООТДЕЛЕНИЕ (ДО НЕСКОЛЬКИХ ЛИТРОВ В СУТКИ) ОПАСНО

1) из-за существенной потери электролитов

2) из-за развивающегося нарушения выделения АДГ

3) из-за снижения нагрузок на клетки почек и их гипотрофии

4) из-за чрезмерного охлаждения организма

4. ГОРМОН ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КАЛЬЦИТОНИН ОТВЕЧАЕТ ЗА

1) снижение уровня кальция в крови

2) повышение уровня кальция в крови

3) снижение уровня натрия в крови

4) повышение уровня натрия в крови

5) обмен железа

5. ГИПОФОСФАТЕМИЯ ВОЗНИКАЕТ ПРИ

1) гиперпаратиреозе

2) сахарном диабете

3) цинге

4) гипопаратиреозе

6. Домашнее задание для уяснения темы занятия (см. контрольные вопросы и ситуационные задачи для 1-го этапа экзамена).

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:

Подготовить презентацию данной темы. Для презентации рекомендуется использовать учебную и научную литературу, а также материалы сайтов Интернета. Приветствуются авторские разработки в виде схем, анимаций, видеороликов.

Рекомендуемая литература

- основная литература:

1. Биохимия: учебник, ред. Е.С. Северин, М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007

2. Руководство к практическим занятиям по биохимии: учеб.для студентов, обучающихся по специальности Лечебное дело и Педиатрия, сост. С.К. Антонова и др.; ред. Л.Л. Петрова, Л.В. Труфанова, Красноярск: КАСС, 2003

3. Возрастная биохимия: учеб.пособие, ред. Л.А. Данилова, СПб.: СОТИС, 2007

- дополнительная литература:

1. Особенности обмена веществ и детоксикациионная функция печени: метод.рекомендации для студентов 2 курса, обучающихся по специальности.- Лечебное дело, Педиатрия, Таксанова Е.И., Салмина А.Б., Красноярск: Версо, 2006

2. Биохимические основы жизнедеятельности человека: учебное пособие, Ю.Б. Филиппович [и др.], М.: ВЛАДОС, 2005

3. Биохимия: руководство к практическим занятиям учеб.пособие, ред. Н.Н. Чернов, М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009

4. Биохимия человека: в 2 т., Мари Р., Греннер Д., Мейес П. [и др.], М., Мир, 2004

5. Клиническая биохимия: учебное пособие, ред. В.А. Ткачук, М.: ГЭОТАР-Медиа, 2004

6. Пособие по клинической биохимии: учебное пособие, Б.А.Никулин, М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007

- электронные ресурсы:

1. Электронная библиотека. Т.14. биологическая химия-CD-ROM, гл. ред. М.А. Пальцев, М.: Русский врач, 2005

2. Биохимия: [Электронный ресурс]

сб.ситуац. задач с эталонами ответов для студентов 2 курса, обучающихся по специальности 060103– Педиатрия

Режимдоступа: http// krasgmu.ru/ common. php? pagecolibris& umkd id=0& type=1988, Герцог Г.Е., Антонова С.К., Климова А.Д.[и др.], Красноярск: КрасГМУ, 2011

3. Биологическая химия: [Электронный ресурс]

сборник тестовых заданий с эталонами ответов для студентов 2 курса, обучающихся по специальности 060103– Педиатрия

Режимдоступа: http// krasgmu.ru/ common. php? pagecolibris& umkd id=0& type=28399, Антонова С.К., Труфанова Л.В., Герцог Г.Е.[и др.], Красноярск, КрасГМУ. 2011.