Студопедия

Главная страница Случайная страница

Разделы сайта

АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника






Подготовка к анализу. Приготовление раствора панкреатина






Приготовление раствора панкреатина. 0, 090 г (точная навеска) панкреатина помещают в колбу объемом 100 см3, куда наливают 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают в течение 30 минут на магнитной мешалке или встряхивают, после чего все содержимое переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. Колбу из-под раствора панкреатина промывают (20-30) см3 дистиллированной воды и переливают ее в мерную колбу. Затем доводят объем раствора в мерной колбе дистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор готовят перед испытанием.

Подготовка к анализу поджелудочной железы крупного рогатого скота (КРС). Берут пробу поджелудочной железы, ножницами вырезают из нее часть, приблизительно, 1 х 1 см, режут на мелкие части, растирают в стерильной ступке, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и перемешивают. Содержимое ступки переносят в колбу вместимостью 100 см3 и перемешивают в течение 30 минут на магнитной мешалке, отстаивают 30 минут. Содержимое колбы пипеткой осторожно (без комков и жира) переносят в мерную колбу (при необходимости фильтруют) вместимостью 100 см3. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой.

Приготовление фосфатного буферного раствора рН 8, 6. Навеску (9, 08 г) калия фосфата однозамещенного (КН2РО4) помещают в мерную колбу объемом 1 дм3 и растворяют дистиллированной водой, объем раствора доводят до метки (раствор ² а²). Навеску (23, 88 г) натрия фосфата двузамещенного (Na2HPO4× 12H20) растворяют дистиллированной водой до метки в мерной колбе вместимостью 1 дм3 (раствор ² б²).

5 см3 раствора ² а² помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора раствором ² б² до метки. Раствор хранят в холодильнике не более 6 месяцев.

Приготовление раствора казеина. Навеску (2, 0 г) казеина растворяют в 90 см3 фосфатного буферного раствора с рН 8, 6 и нагревают в течение 15 минут на водяной бане при температуре (85±5) °С, периодически перемешивая стеклянной палочкой. Раствор охлаждают до комнатной температуры, весь полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки тем же буферным раствором.

Приготовление 0, 5 м раствора карбоната натрия.

Навеску (53 г) натрия карбоната безводного помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм3, добавляют 50 см3 дистиллированной воды, перемешивают, объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. Раствор годен 7 дней.

Построение калибровочного графика. Навеску (0, 0453 г) тирозина помещают в мерную колбу объемом 25 см3, добавляют 10 см3 0, 2 моль.дм-3 раствора хлористоводородной кислоты (ХВК), перемешивают, доводят объем до метки раствором ХВК. Отбирают 0, 6; 1, 2; 2, 4; 3, 6; 4, 8; 6, 0 см3 приготовленного раствора в мерные колбы объемом по 100 см3 и доводят объем растворов до метки 0, 2 моль.дм-3 раствором ХВК. Полученные растворы содержат соответственно 0, 06; 0, 12; 0, 24; 0, 36; 0, 48; 0, 60 микромолей тирозина в миллилитре.

В ряд пробирок наливают по 1 см3 полученных растворов тирозина, прибавляют при перемешивании по 5 см3 0, 5М раствора карбоната натрия и по 1 см3 реактива Фолина, предварительно разведенного водой 1: 2. Измеряют оптическую плотность растворов на КФК при длине волны 670 нм или на СФ при длине волны 630 нм в кювете с толщиной слоя, равной 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий смесь тех же реактивов, но вместо раствора тирозина добавляют 1 см3 дистиллированной воды.

Построение калибровочного графика: по оси абсцисс откладывают количество тирозина в микромолях на миллилитр исходного раствора, а по оси ординат – соответствующую плотность.

 

ВЫПОЛНЕНИЕ АНАЛИЗА

В две пробирки наливают по 2 см3 раствора казеина и помещают в термостат при температуре (37, 0±0, 1) °С на 10 минут. В первую пробирку (испытуемая проба) наливают 2 см3 раствора панкреатина. Обе пробирки помещают в термостат при температуре (37, 0±0, 1) °С на 15 минут (по секундомеру), затем в обе пробирки наливают по 4 см3 5 % раствора ТХУК, перемешивают. Во вторую пробирку (контроль) наливают 2 см3 раствора панкреатина. Обе пробирки помещают в термостат при (37, 0±0, 1) °С на 20 минут. После этого содержимое пробирок фильтруют через бумажный фильтр с синей лентой. Затем в новые пробирки отбирают по 1 см3 фильтратов, наливают по 5 см3 0, 5М раствора натрия карбоната и по 1 см3 реактива Фолина, предварительно разведенного водой 1: 2. Через 20 минут измеряют оптическую плотность полученных растворов на КФК при длине волны 670 нм или на спектрофотометре при длине волны 630 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют дистиллированную воду.

 






© 2023 :: MyLektsii.ru :: Мои Лекции
Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав.
Копирование текстов разрешено только с указанием индексируемой ссылки на источник.