Комбинированные методы. Основаны на сочетании фи­зических, химических и биологических методов создания анаэробиоза Правила пересева микроорганизмов в лабораторных условиях

Микроорганизмы в лабораторных условиях выращивают обычно в пробирках, чашках Петри, на жидких или плотных питательных средах.

При пересеве микроорганизмов с одной среды на другую или при извлечении части клеток для приготовления микропрепарата необходимо строго соблюдать условия, которые позволили бы предохранить культуру от загрязнения другими микроорганизмами, а также персонал от инфицирования микроорганизмами, находящимися в исследуемом материале.

Для приготовления препарата микроорганизмов, выращенных на поверхности плотной питательной среды, или для пересева культуры с одной среды на другую пользуются бактериологической петлей.

Петля представляет собой тонкую проволоку из платины или нихрома, прикрепленную к держателю из металла. Конец проволоки загибают в виде кольца диаметром около 2 мм, которым и захватывают небольшое количество микробной массы.

Но прежде, чем такая петля будет введена в пробирку, колбу или чашку Петри с культурой, ее необходимо простерилизовать, т.е уничтожить имеющиеся на ней микроорганизмы. Стерилизацию бактериологической петли проводят в пламени горелки так, чтобы проволока была равномерно раскалена на всем протяжении. Лишь после такой стерилизиции петлю можно вводить в пробирку с культурой микроорганизмов.

Прикосновение к культуре слишком горячей петли может повредить клетки, поэтому петлю следует предварительно остудить, прикоснувшись ею к внутренней поверхности пробирки или к питательной среде, свободной от микробных клеток.

Извлечение микроорганизмов из пробирки для приготовления препарата или для пересева в иную среду производится следующим образом.

Пробирку с культурой берут в левую руку так, чтобы была хорошо видна вся поверхность питательной среды с выросшими на ней микроорганизмами. Пробирка должна находиться в слегка наклонном положении. Петлю для пересева берут в правую руку и держат ее так, как держат ложку во время еды (для тех, у кого рабочей рукой является левая, работа проводится в зеркальном отражении к правой руке). Не выпуская петли, открывают пробирку, из которой берется культура. Делают это так: мизинцем и безымянным пальцами правой руки прижимают пробку к ладони и вынимают ее из пробирки. Пробку, прижатую к ладони пальцами, держат на протяжении всей последующей манипуляции. Класть ее на стол ни в коем случае нельзя, чтобы не загрязнить микрофлорой окружающей среды, через нее и культуру в пробирке, а также с целью, чтобы микробы, находящиеся в пробирке, не заразили окружающую среду и тех, кто с ними работает.

После того как пробка вынута из пробирки, края открытой пробирки с культурой обжигаются в пламени горелки и только после этого стерильную петлю вводят в пробирку.

Взяв небольшое количество микробной массы с поверхности субстрата, петлю вынимают из пробирки, следя за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок или краев пробирки. Края пробирки снова обжигают в пламени горелки, затем обжигают пробку и закрывают нею пробирку. Если конец пробки загорится, ее нужно быстро внести в пробирку, где пробка потухнет из – за недостачи кислорода.

Закрытую пробкой пробирку с культурой ставят в штатив, а извлеченный материал используют для приготовления микропрепарата или для пересева культуры в свежую среду.

Если пересевают на скошенную агаризованную среду, то петлю вводят в пробирку до нижней части питательной среды в капельку конденсационной воды и, слегка касаясь петлей поверхности среды, штрихообразными движениями поднимают петлю вверх. Посев следует делать так, чтобы не повредить поверхности питательной среды. При пересеве на жидкие среды (в колбу или пробирку) петлю с микробной массой погружают непосредственно в среду.

Оставшиеся на петле после пересева или приготовления микропрепарата клетки микроорганизмов тщательно сжигают в пламени горелки. Прокаливание петли начинают с участка проволоки, примыкающего к кольцу, для того, чтобы микробная масса, оставшаяся на петле, подсохла. Затем петлю переводят в вертикальное положение и прокаливают докрасна. Только после этого петлю можно положить на место.

Когда нужно приготовить препарат или произвести пересев культуры микроорганизмов, выросших в жидкой питательной среде, лучше пользоваться не петлей, а применять стерильную пипетку.

Пипетку за верхний конец вынимают из бумаги или пенала, в которых она стерилизовалась, и вводят в пробирку или в колбу с культурой, соблюдая все предосторожности, описанные выше. Отбор жидкой культуры пипеткой можно производить с помощью резиновой груши. Использованную пипетку следует немедленной поставить в сосуд с дезинфицирующим раствором, не касаясь ею окружающих предметов.

При посеве материала в чашку Петри крышку ее следует только приоткрывать для того, чтобы не загрязнить культуру микробами из воздуха, которые вместе с пылинками, витающими в воздухе, могут осесть на питательную среду в чашке.

Все описанные манипуляции следует проводить около пламени горелки быстро, аккуратно, внимательно, чтобы не загрязнить культуру посторонними микроорганизмами и не распространить исследуемую культуру в окружающей среде.

Во время работы нельзя производить резких движений, разговаривать и передвигаться по лаборатории.

Культуры микроорганизмов, не нужных для дальнейшей работы, следует убить. Для этого сосуды с отработанными культурами микроорганизмов (колбы, пробирки, матрацы, Чашки Петри и пр.) автоклавируют и только после этого моют