Диагностика хеликобактериоза.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ диагностика Helicobacter pylori (НР) отличается своей технической сложностью и дороговизной. Поскольку биоптат слизистой оболочки желудка или 12-перстной кишки извлекается в эндоскопическом отделении, а его исследование проводится в микробиологической лаборатории, то существует проблема транспортировки материала. Данную проблему осложняет то, что НР является микроанаэрофилом, т.е. концентрация кислорода в атмосферном воздухе слишком высока для него и кислород губительно действует на микроорганизм. Одной из лучших транспортных сред является 0, 5 мл 20% раствора глюкозы. При температуре +4º С биоптат может сохраниться в ней в течении 5 часов без потери жизнеспособности бактерий. НР растет микроанаэростате с использованием газогенераторных пакетов. Время инкубации в термостате – 3 - 5 дней. При окраске по Граму бактерия окрашивается Грам – отрицательно.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ выявления НР. Обнаружить НР можно и на обычных, окрашенных гематоксилином и эозином препаратах, если они достаточно тонкие и хорошо окрашены. Однако целесообразно проводить элективные методы окраски. Лучшими из них являются: по Граму, по Романовскому-Гимзе, по Вартину-Старри (кстати, именно при этой окраске биоптатов их и обнаружили в 1983 г.), акридиновым оранжевым, карболовым фуксином, толуидиновым синим. В зависимости от того, какая методика применяется в лаборатории лечебного учреждения, такую и целесообразно использовать, поскольку чувствительность их близка, хотя считаются более чувствительными окраски по Гимзе и акридиновым оранжевым (85% и 79% соответственно). В тоже время окраска по Граму позволяет выявлять даже кокковые формы микроорганизма. При выполнении микробиологических и морфологических методов диагностики НР необходимо помнить, что микроб обычно колонизирует неравномерно и в биоптат могут не попасть колонии НР. Для повышения точности исследования необходимо брать несколько биоптатов, поднимаясь от пилорического отдела желудка к кардии (3-5 кусочков). Описанные методики не только достаточно дороги, требуют высокой диагностической техники, но и результат исследования получается через несколько дней (7-10). Современные методики цитологического исследования мазков желудочной слизи или раздавленных биоптатов СОЖ считаются более информативными, дешёвыми, быстрыми и технически простыми, чем поиск НР в биоптате.

Обсемененность НР гистологических препаратах (цитологических) определяют при увеличении х 630, а лучше – х 1000.

Для ускорения диагностики предлагаются инвазивные методики, дающие результат непосредственно во время исследования. Из них можно назвать такие биохимические тесты, как промышленно выпускаемые системы " CLO- тест", " Кампи-тест" и др. Используемая в настоящее время диагностическая система " Pronto Dry" позволяет выявлять инфицированность НР непосредственно при выполнении эндоскопического исследования в течение 5 минут. Для этого достаточно нанести на слизистую желудка специальный реактив и по изменению окраски судить о наличии или отсутствии НР

Они основаны на способности НР разрушать мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. При этом в случае внесения биоптата в раствор мочевины с индикатором типа фенолрот меняется окраска раствора. Однако, не смотря на высокую чувствительность эти тесты могут давать отрицательные результаты в связи с отсутствием НР в биоптате. В последнее время для повышения чувствительности исследования предложены иммунологические тесты, выполняемые непосредственно на слизистой желудка о время эндоскопии. Во время эндоскопии на слизистую наносят специальные антисыворотки против НР или раствор мочевины с индикатором и по изменению окраски слизистой судят о наличии микроорганизма.

Значительно более простым и эффективным способом диагностики НР считается использование неинвазивных биохимических и иммунологических тестов диагностики НР.

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ диагностики НР в настоящее время распространяются повсеместно. Они основаны на способности НР расщеплять мочевину. Для исследования используется мочевина, меченная изотопами углерода ¹³C и ¹⁴C. Это так называемые уреазныедыхательные тесты.

При их проведении пациент после пробного завтрака получает 20, 0 водного раствора мочевины, меченной изотопом углерода. Спустя 10, 20, 30, 40, 60, 80, 100, 120 минут пациент выдыхает воздух в специальный сосуд, содержащий вещества, связывающие выдыхаемый углекислый газ, или на специальную пластину. В зависимости от количества выделяемого меченного углекислого газа судят о наличии или отсутствии НР на слизистой желудка. Диагностическая чувствительность и специфичность данных тестов превышает 95%. Однако, данная методика отличается очень высокой стоимостью, поскольку требует очень дорогого оборудования (до 250.000 долларов США), а изотоп ¹⁴C обладает радиоактивностью. Близкие методики предполагают использование мочевины, содержащей изотоп азота ¹⁵N. По выделяемому с мочой меченому азоту в течение 2 часов получают результат исследования. Чувствительность этого метода составляет 96% при 100% специфичности.

Биохимические методики диагностики НР в настоящее время считаются наиболее удобными для скрининг - диагностики и оценки эффективности эрадикации НР.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ диагностики НР в настоящее время успешно конкурирует с биохимическими методиками. Они основаны на определении специфических анти-НР антител классов А, М, G в крови больного. Наиболее употребительными являются методики с использованием иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA). В настоящее время, как в нашей стране, так и за рубежом, выпускаются специфические антисыворотки, позволяющие не только определять НР как вид, но и отдельные его штаммы различной патогенности. Чувствительность этих тестов очень высока. Так тест-система " BIOMERICA" имеет чувствительность 99, 4%, специфичность 93, 5%, точность – 97, 4%. Они минимально затруднительны для больного. Для исследования достаточно 5 мл венозной крови. ELISA – тесты считаются идеальными в педиатрической практике, при массовых обследованиях населения. У них есть один недостаток – их не возможно использовать для быстрой оценки эффективности эрадикации НР, поскольку специфические антитела медленно исчезают из крови больного. Этот процесс может растянуться до 6 месяцев.

В настоящее время в практику довольно широко внедряется диагностика НР с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Методика достигает 100% чувствительности и специфичности. Субстратом являются биоптат слизистой желудка, мазок или соскоб желудочной слизи. ПЦР может быть использована для быстрой оценки эффективности эрадикации возбудителя.