Вирусологическое исследование

Исследование включает культивирование на культуре клеток и идентификация вируса, постановка биопробы. Для культивирования вирусов используют первично трипсинизированную культуру клеток или используют перевиваемые культуры клеток, обладающих бесконечной потенцией роста in vitro (FHM – из тканей хвостового стебля жирноголового гольяна, RIG₂ – из гонад радужной форели, EPC – из клеток оспенных разростов на коже карпа). Перевиваемые культуры выбирают исходя из предполагаемой природы вируса. Первично трипсинизированную культуру клеток готовят из гонад самок рыб II-й и III-й стадии зрелости по шкале Киселевича. Для трипсинизации используют 0, 5 %-ный раствор трипсина вместо 0, 25 %, так как работа ведется при комнатной температуре. Степень поражения клеточного монослоя выражают в крестах (25 % – +; 50 % – ++; 75 % – +++; 100 % – ++++).

Для идентификации вирусов используют несколько взаимодополняющих методов: электронную микроскопию, изучение физико-химических свойств вируса, обнаружение характерных морфологических изменений в зараженных клетках, серологические методы (РН, РП, РСК и др.).

Биологическая проба

Биопроба ставится для окончательного установления диагноза. При постановке ее с целью определения патогенности возбудителя применяют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей, естественно больных или подозреваемых в заражении рыб. Биопробу ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей болезни. Для биопробы берут заведомо здоровую рыбу того же вида и возраста. Наблюдения ведут ежедневно, учитывая количество погибших рыб, клинические изменения и характер патологоанатомических изменений. Длительность опыта определяется с учетом инкубационного периода.

Заражение рыб проводят следующими способами: per os; подкожно; внутримышечно; внутрибрюшинно; контактным методом; орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей возбудителя; скарифицированием кожи.

Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биопроба считается положительной, если у 80 % зараженных рыб проявляется весь комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50 % больных рыб, при выделении от погибших рыб исходных возбудителей.

Болезни инфекционной этиологии

Вирозы

Весенняя виремия карпов (ВВК, краснуха, инфекционная водянка, геморрагическая септицемия) – инфекционная вирусная болезнь рыб, характеризующаяся нарушением координации движения, появлением отеков в различных частях тела, ерошением чешуи, экзофтальмией, геморрагиями в кожных покровах у основания грудных и брюшных плавников.

Этиология. Возбудитель болезни РНК–геномный вирус из сем. Rabdoviridae, пулевидной формы, размером 25–85 нм (70–125 нм).

Эпизоотология. Болеют карпы 1–2-летки, белый амур, белый и пестрый толстолобик ранней весной при температуре воды 10–14 °С. Летальность может достигать 45 %.

Симптомы и течение. Инкубационный период 7–30 дней. Больная рыба плавает по кругу или штопорообразно. Наблюдается ерошение чешуи, вздутие брюшка, точечные кровоизлияния и покраснение кожи у основания грудных и брюшных плавников, потемнение кожи, анемия жабр, серповидные кровоизлияния в глазном яблоке. Асцит (скопление в брюшной полости кровянистого экссудата).

Диагноз. Учитывают сезонность, характерные симптомы болезни, проводится вирусологическое исследование и ставится биопроба.

Дифференциальный диагноз. Следует дифференцировать от эритродерматита карпов, аэромоноза, псевдомоноза.

При эритродерматите карпов выделяют возбудителя Aeromonas salmonicida. При аэромонозе, помимо геморрагического диатеза, на коже появляются язвы, отмечается восковидный некроз скелетных мышц, и бактериоскопией выделяют аэромонад. При псевдомонозе отмечают потемнение и зеленоватый оттенок, а также ерошение чешуи. Печень с кровоизлияниями. Бакисследованием выделяют псевдомонад.

Профилактика и меры борьбы. При возникновении ВВК на хозяйство накладывают карантин и проводят весь комплекс противоэпизоотических мероприятий, предусмотренных ветеринарным законодательством по ликвидации заразных болезней. Рыбу с неблагополучных прудов, имеющую товарный вид, реализуют в торговую сеть. Неблагополучный пруд выводят на летование. Ложе пруда дезинфицируют негашеной (25–30 ц/га) или хлорной (3–5 ц/га) известью, перепахивают и засевают бобовыми травами.

Карантин снимают через 1 год после последнего случая клинического проявления болезни при условии получения отрицательного результата вирусологических исследований рыб из неблагополучных прудов.

Оспа карпа – характеризуется разрастанием эпителиальной ткани кожи с образованием на теле эпителиом матово-голубого цвета. Заболевание встречается как в естественных водоемах, так и в прудовых хозяйствах.

Этиология. Возбудитель болезни – вирус ДНК-геномный из семейства Herpesviridae. Его вирионы округлой формы диаметром до 110 нм, размножаются в ядре эпителиальных клеток.

Эпизоотология. Поражаются, главным образом, карпы, сазаны и их гибриды, разводимые в прудах. Наиболее часто поражаются двухлетки. Молодь и годовики обычно оспой не болеют. Заболевание проявляется летом и осенью. К осени – количество больной рыбы возрастает. В зимнее время этот показатель сохраняется на одном уровне, а весной среди рыб неблагополучного стада вновь увеличивается число больных особей. Гибель рыб наблюдается редко. При спонтанном течении заболевания, без принятия необходимых мер, тяжесть болезни увеличивается из года в год. Этому также способствует антисанитарное состояние прудов (зарастание, заболачивание, загрязнение), снижение их проточности, слабая селекционная работа и подбор производителей для нерестовой кампании, недостаточное количество и несбалансированность кормов.

Источником заражения служат больные рыбы. Способствующий фактор – недостаток в воде и почве кальция.

Заболевание распространяется при завозе в благополучные хозяйства молоди рыб из неблагополучных хозяйств.

Симптомы и течение. Вначале у рыб появляются небольшие одиночные беловатые пятна на кожных покровах туловища, хвоста, плавников. Затем, вследствие гиперплазии клеток эпидермиса, кожа в пораженных местах утолщается и образуются плоские эпителиомы, которые возвышаются над поверхностью остального кожного покрова. При тяжелой форме болезни отдельные опухоли сливаются, образуя сплошной слой толщиной 2–4 мм, покрывающий всю поверхность тела. В начальной стадии болезни эпителиомы имеют гладкую блестящую поверхность и мягкую консистенцию.

При хроническом течении болезни поверхность оспенных образований становится шероховатой, уплотняется и приобретает твердую консистенцию, напоминающую хрящевую ткань. При дальнейшем развитии в процесс вовлекается и подлежащая мышечная ткань, которая теряет упругость и инфильтрируется жидкостью. Кости скелета размягчаются, происходит его деформация.

Диагноз ставят на основании клинических признаков.

Дифференциальный диагноз. Оспу надо дифференцировать от эктопаразитарных болезней (триходиноз, хилодонеллез, ихтиофтириоз), при которых на кожных покровах появляется слизистый голубовато-серый налет. Однако, в отличие от оспенных поражений, он имеет не очаговый, а разлитой характер и покрывает почти все тело. При микроскопии соскобов с кожи при эктопаразитозах обнаруживают паразитов.

Профилактика и меры борьбы. На неблагополучные хозяйства накладывают ограничения. Запрещается вывоз рыб в другие водоемы. Сильно пораженных оспой рыб к употреблению в пищу людям не допускают. Ее проваривают и направляют в корм животным. Проводят комплекс ветеринарно-санитарных и рыбоводно-мелиоративных мероприятий, направленных на улучшение условий среды обитания рыб. Действенным методом ликвидации и профилактики заболевания является периодическое летование прудов. При недостатке в воде и почве кальция пруды систематически известкуют, а в корм рыбы включают дополнительно мел (до 5 % суточного рациона). В кормовую смесь добавляют витаминсодержащие компоненты: зеленую пасту из луговой и водной растительности (до 20 % к рациону), гидролизные дрожжи (до 3–4 % рациона). Улучшают селекционно-племенную работу, исключающую инбридинг и позволяющую получать устойчивое к данному заболеванию потомство.