Лабораторные методы исследования

Лабораторная диагностика обеспечи­вается применением как общеклинических, так и сложных биохимических и морфологических методов. Важную роль играет ряд функциона­льных методов, позволяющих судить о состоянии функций отдельных сис­тем, а также объективно оценить эф­фективность проводимого лечения.

Заключение о диагнозе должно основываться на достоверных при­знаках. Обследование больного, за редким исключением, предполагает проведение дополнительных исследо­ваний после расспроса и осмотра.

Диагностическое заключение врач составляет поэтапно. Во время рас­спроса больного у врача создается представление о характере заболева­ния, а затем на основании результа­тов осмотра он конкретизирует свои предположения. Дополнительные ме­тоды должны подтвердить или уточ­нить их. В ряде случаев только лабораторно-инструментальные исследо­вания позволяют установить оконча­тельный диагноз.

Арсенал диагностических средств и методов постепенно пополняется новыми, а старые методы совершенст­вуются. В стоматологии широко при­меняют микроскопические и сероло­гические исследования, диагностику лекарственной аллергии, а также об­щеклинические (клинический анализ крови, мочи и др.) методы.

Микроскопические методы иссле­дования. Способы изучения микро­скопического строения различных объектов используют в стоматологии для определения клеточного строе­ния раневой поверхности, качествен­ных изменений клеток слизистой оболочки, бактериального состава поверхности слизистой оболочки или раны. В зависимости от цели разли­чают цитологический метод, био­псию и бактериологическое исследо­вание.

Цитологический метод основан на изучении структурных особенностей клеточных элементов и их конгломе­ратов. Метод прост, безопасен для больного, достаточно эффективен и надежен, позволяет быстро получить результаты, а при необходимости можно повторить исследование. Цитологический метод применяют для определения эффективности прово­димого лечения. Кроме того, цитоло­гическое исследование может быть проведено независимо от стадии и те­чения воспалительного процесса и -даже в амбулаторных условиях.

Материалом для цитологического исследования могут быть мазок-отпе­чаток, мазок-перепечаток, мазок-соскоб с поверхности слизистой обо­лочки, эрозии, язвы, свищей, пародонтальных карманов, а также осадок промывной жидкости, использован­ной для полоскания полости рта, и пунктат участка, расположенного в глубоколежащих тканях.

Мазки-отпечатки с раневой по­верхности могут быть получены дву­мя способами. Первый способ: хоро­шо обезжиренное стекло (после дли­тельного хранения в 96 % этиловом спирте) прикладывают к эрозии или язве слизистой оболочки рта, крас­ной каймы губ. Однако этот способ неприемлем, если язва локализуется на труднодоступном участке или ма­териал необходимо получить с глубоколежащего участка язвы. Второй способ: ученическую резинку нареза­ют длинными узкими столбиками с поперечным размером до 5× 5 мм, стерилизуют кипячением и хранят в сухом виде. При необходимости столбик резинки прикладывают к ра­невой поверхности, а затем делают отпечатки на обезжиренном пред­метном стекле. Недостатком указан­ных способов является то, что не всегда удается получить нужное ко­личество материала, нередко преоб­ладают некротические массы. Осо­бые затруднения возникают при не­обходимости получения материала со дна язв, гиперпластических и опухо­левых разрастаний. В таких случаях материал для цитологического иссле­дования целесообразно получать пу­тем мазка-соскоба. С исследуемого участка удаляют некротические мас­сы, а затем стоматологическим шпателем или гладилкой производят соскоб. Кюретажной ложечкой ложечкой пользуются для получения материала из свищевых ходов, с уплотненных краев язв, при этом следует избегать попадания крови на предметное стекло.

При генерализованных поражени­ях полости рта (гингивит, пародонтит, катаральный стоматит и т.п.), а также для определения степени реак­тивности элементов ретикулоэндотелиальной системы исследуют осадок промывной жидкости после серийных полосканий полости рта по Ясиновскому.

Пункцию применяют при необхо­димости получить материал с участка уплотнения, из увеличенных лимфа­тических узлов и др. Эту манипуля­цию производят шприцем вместимо­стью 5-10 мл, который после обыч­ной стерилизации обезвоживают 96 % спиртом, и инъекционной иглой длиной 6-8 см. Путь инъекционной иглы должен быть наиболее корот­ким и безопасным. При проведении пункции поверхностно расположен­ных новообразований и лимфатиче­ских узлов их фиксируют большим и указательным пальцами левой руки, а конец иглы вводят на нужную глуби­ну. После этого участок ткани, зажа­той пальцами левой руки, слегка раз­минают, что способствует получению большего количества материала. За­тем поршень отводят на 1 – 1, 5 см, шприц с иглой разъединяют, а по­ршень приводят в исходное положе­ние. Манипуляцию повторяют 2—3 раза. После получения пунктата иглу извлекают из ткани, содержимое шприца выдавливают на предметное стекло. Одной-двух капель получен­ного материала обычно достаточно для изучения клеточного состава тка­ней на исследуемом участке. При на­личии значительного количества кро­ви мазки делают незамедлительно, так как из свернувшегося содержимо­го трудно приготовить удовлетвори­тельные препараты.

Материал, полученный любым указанным способом, высушивают при комнатной температуре (сушить в пламени горелки или другим спосо­бом при высокой температуре не ре­комендуется, так как может произой­ти деформация или разрушение кле­ток). Препараты фиксируют в мети­ловом спирте или смеси Никифоро­ва. Окрашивание производят азур-эозином в течение 25 мин. Для сроч­ного окрашивания используют рас­твор азур-эозина 10-кратной концен­трации и обрабатывают им препарат в течение 5 мин.

Цитологическая картина при акантолитической пузырчатке, некоторых вирусных инфекциях, опухолях и ту­беркулезных язвах имеет свою специ­фику. При других заболеваниях (травматическая язва, красный плос­кий лишай и др.) специфические из­менения в клетках отсутствуют.

Существует правило, согласно ко­торому при постановке диагноза сле­дует руководствоваться не только ре­зультатами цитологического исследо­вания, но и клиническими данными, а при направлении материала на ци­тологическое исследование необхо­димо указывать клинический диа­гноз.

Следует соблюдать осторожность при несовпадении цитологического и клинического диагнозов, особенно при основанном на клинических данных предположении о наличии злокачественного новообразования. Несовпадение может быть результатом неудачного взятия материала (неправильно выбрано место для получения материала, слишком по­верхностный соскоб и др.). Практика показала, что диагностика наиболее достоверна в тех случаях, когда ци­толог сам берет материал для иссле­дования.

Несовпадение клинического и ци­тологического диагнозов при пузырчатке служит показанием к повторно­му цитологическому исследованию. При подозрении на наличие опухоли и неясности цитологической картины
проводят повторное исследование или биопсию.

Объектом исследования в терапев­тической стоматологии служат эрозии, язвы, трещины, пузыри и пузырьки. Особое внимание следует уделять эрозиям, язвам и трещинам, характеризующимся длительным течением и наличием признаков ги­перкератоза по периферии.

Цитологическая картина при про­стом герпесе характеризуется появле­нием гигантских многоядерных кле­ток. Считают, что они образуются в результате баллонирующей дегенера­ции, акантолиза и слияния большого количества клеток вследствие частич­ного расплавления клеточных оболо­чек.

При всех формах акантолитической пузырчатки в полости рта, как правило, обнаруживают типичные для этой патологии клетки — акантолитические клетки пузырчатки, или клетки Цианка.

Цитологическое исследование соскоба с туберкулезных язв выявляет специфическую картину: клеточные элементы туберкулезного бугорка, эпителиоидные клетки, гигантские клетки Лангханса, элементы неспеци­фического воспаления (лимфоциты, нейтрофилы, плазматические клетки, макрофаги). Кроме того, обнаружива­ются обычная микрофлора полости рта, нередко большое количество нейтрофилов.

При раке слизистой оболочки рта и красной каймы губ цитологическая картина зависит от характера опухо­ли. Так, при экзофитной форме рака, особенно в ранней стадии, цитологи­ческое исследование может не выя­вить признаков заболевания. В по­добных случаях, когда на основании клинических данных заподозрен рак, показана биопсия. Следует отметить, что строго специфические морфоло­гические признаки, присущие только опухолевой клетке, отсутствуют, но все же имеется совокупность наибо­лее характерных изменений, свойст­венных злокачественным новообра­зованиям. Основным свойством злокачественных клеток является мор­фологическая и биологическая анаплазия. Злокачественные клетки со­здают картину клеточного и ядерного полиморфизма. К общим критериям злокачественности относятся измене­ния клетки, ядра, ядрышек и некото­рые другие признаки: размер клетки, ее форма, соотношение между ядром и клеткой и др.

Биопсия - прижизненное иссече­ние тканей для микроскопического исследования с диагностической це­лью. Она позволяет с большей точно­стью диагностировать патологиче­ский процесс, так как в материале, предназначенном для исследования, при его правильной фиксации не происходит изменений, связанных с аутолизом. Биопсию производят в тех случаях, когда установить диагноз с помощью других методов не удается, а также при необходимости подтвер­ждения клинических предположений. При биопсии достаточно взять кусо­чек ткани диаметром 5—6 мм; если пораженный участок небольшой, то его иссекают полностью (тотальная биопсия). Материал помещают в фиксирующий раствор и направляют на гистологическое исследование. В направлении указывают краткие клинические сведения и предположи­тельный диагноз (один или несколь­ко), так как отсутствие его может привести к диагностической ошибке.

Клиницист должен критически от­носиться к результатам гистологиче­ского исследования, особенно если они не соответствуют хорошо обо­снованным клиническим данным. Во избежание диагностической ошибки повторно оценивают клинические данные, тщательно изучают матери­ал, полученный при биопсии (это лучше делать другому специалисту), а при необходимости проводят повторную биопсию.

Бактериологическое исследование – бактериоскопия материала, получаемого с поверхности слизистой оболочки рта, язв, эрозий. Это исследование проводят во всех случаях, когда нужно уточнить причину поражения слизистой оболочки, при специфиче­ских заболеваниях, гнойных процес­сах, для определения бациллоносите­льства. Часто установить причину ин­фекционного поражения слизистой оболочки не удается из-за наличия в полости рта огромного количества микроорганизмов. Возбудителей спе­цифической инфекции (сифилис, ту­беркулез, гонорейное поражение, актиномикоз, лепра, грибковые заболе­вания) также определяют с помощью бактериологических исследований.

В лабораторной практике применя­ют микроскопию нативных и фикси­рованных препаратов. В первом слу­чае препараты готовят из свежего не­обработанного материала. Предмет­ные стекла для получения препаратов должны быть прозрачными, чистыми и обезжиренными, толщиной 1— 1, 2 мм. Сначала стекла кипятят в 1 % растворе гидрокарбоната натрия, за­тем промывают водой, хлористоводо­родной кислотой и еще раз водой. Стекла хранят в 95 % этиловом спирте в банке с притертой пробкой или про­тертыми досуха в закрытых сосудах.

Более широко используют бакте­риоскопию фиксированных препара­тов, в стоматологии — для подтверж­дения или исключения грибковых поражений, в частности вызываемых дрожжеподобными грибами Candida. Эти грибы в небольшом количестве встречаются в полости рта как сапрофиты у 50 % здоровых людей.

Материал для исследования берут утром натощак до чистки зубов и по­лоскания полости рта или через 3-4 ч после приема пищи и полоскания. При получении материала для бакте­риологических исследований соблю­дают определенный порядок: 1) до взятия мазков не следует применять никаких лекарственных полосканий; 2) перед взятием мазков больному рекомендуют прополоскать рот теплой водой; 3) поверхность язвы очищают стерильным марлевым тампоном; 4) материал берут из глубины язвы; 5) полученный материал немедленно направляют в лабораторию; 6) посев на специальные среды может быть произведен непосредственно в каби­нете. Несоблюдение этого порядка может привести к ложноотрицательному заключению. Наличие единич­ных дрожжеподобных клеток в препа­рате, даже в стадии почкования, не имеет диагностического значения и расценивается как носительство. Обнаружение большого количества эле­ментов гриба, множественное почко­вание и наличие мицелия или псевдо­мицелия свидетельствует об его паразитировании. Бактериоскопическое исследование проводят периодически в процессе лечения, эффективность терапии оценивают на основании ре­зультатов лабораторных исследова­ний.

Обнаружение бледной трепонемы под микроскопом в темном поле слу­жит самым надежным подтверждени­ем диагноза первичной сифиломы (твердого шанкра). Это основной ме­тод выявления заболевания, так как серологические реакции становятся положительными только через 2-3 нед после возникновения твердого шанкра. Трепонемы содержатся в бо­льшом количестве в папулах и эрози­ях при вторичном сифилисе.

При язвенном гингивите и стома­тите Венсана в 100 % случаев выявля­ют фузоспирохеты, преобладающие над другой микрофлорой.

Серологическое исследование. К серологическим относятся методы изучения определенных антител и ан­тигенов в сыворотке крови больного, а также выявления антигенов микро­организмов или тканей с целью их идентификации, основанные на реак­циях иммунитета.

Реакции Вассермана (реакция свертывания комплемента), Кана и цитохолевую (осадочные реакции) применяют для диагностики сифили­са. При сифилисе серологические ре­акции становятся положительными через 2-3 недели после возникновения твердого шанкра (спустя 5-6 недель после заражения), при вторичном сифилисе они резко положительные, а при третичном сифилисе положите­льные в 50-70 % случаев. Следует помнить, что реакция Вассермана иногда может быть отрицательной даже во вторичном периоде сифили­са. В связи с этим во избежание оши­бок при подозрении на сифилис сто­матолог обязан послать пациента на консультацию к венерологу.

С помощью серологических проб выявляют лиц, инфицированных ви­русом иммунодефицита человека (ВИЧ). При подозрении на бруцеллез применяют серологические реакции Райта или Хаддлсона.

Диагностика лекарственной аллер­гии. Диагностика сенсибилизации к лекарственным препаратам достаточ­но сложна, что обусловлено значите­льным разнообразием иммунологиче­ских механизмов, определяющих кли­ническую симптоматику. В одних слу­чаях реакцию формирует взаимодей­ствие антигена Е с IgE, фиксиро­ванным на мембранах полинуклеаров и макрофагов (аллергические реакции I типа). Для этого механизма типичны анафилактический шок, формирование волдырей, отеков. В других случа­ях преобладают явления цитолиза вследствие взаимодействия антигена с антителом при участии компонентов комплемента на уровне мембран кле­ток (аллергические реакции II типа). В результате развиваются гемолиз, лейкопения, тромбоцитопения.

Тип III аллергических реакций ха­рактеризуется отложением иммунных комплексов в сосудистой стенке, что обусловливает развитие феномена Артюса, экзантемы с проявлениями на коже и слизистых оболочках и др.

К аллергическим реакциям IV типа относятся синдромы, которые фор­мируют проявления гиперчувствите­льности замедленного типа - клеточ­ные реакции с участием лимфоцитов, например лекарственные экземы, контактные дерматиты и стоматиты.

В связи с многотипностью аллергических осложнений, наслоением неспецифических токсических проявлений надежность и результативность диагностических тестов довольно низкие.

Условно можно выделить следую­щие основные методы диагностики лекарственной аллергии: сбор аллергологического анамнеза, постановка кожных и провокационных проб, проведение лабораторных исследова­ний, в том числе неспецифических и специфических тестов.

Сбор аллергологического анамнеза - первый этап обследования, который играет очень важную, а возможно, и основную роль в диагностике лекар­ственной аллергии. Правильно со­бранный анамнез позволяет устано­вить наличие аллергена и обосновать последующие этапы аллергологиче­ского обследования.

При расспросе больного следует выяснить наличие в прошлом аллер­гических заболеваний (бронхиальная астма, поллиноз, или сенная лихо­радка, экзема, ревматизм и др.) у него, его родителей и родственников. Это важно, потому что у лиц, пред­расположенных к аллергическим проявлениям, чаще наблюдаются ал­лергические реакции на лекарствен­ные вещества.

Далее следует выяснить, какое ле­карственное средство больной при­нимал длительное время или часто, так как аллергическая реакция чаще всего возникает на многократно при­меняемые препараты; имеется ли по­вышенная чувствительность к отдель­ным пищевым продуктам, пыльце растений, химическим веществам, укусам насекомых, шерсти животных, духам и другим аллергенам.

Больного расспрашивают о нали­чии грибковых поражений кожи и ногтей типа эпидермофитии и трихо­фитии. Известно, что у 8-10 % боль­ных с этими заболеваниями могут возникать острые аллергические ре­акции на первое введение пеницил­лина в связи с наличием общих антигенных свойств у трихофитона, эпидермофитона и пенициллина и возможной латентной сенсибилизации к нему. Выясняют, имеется ли у боль­ного профессиональный контакт с лекарственными веществами и с ка­кими.

Собранный аллергологический анамнез врач должен оценить крити­чески, так как информация больного не всегда бывает объективной. Уста­новление связи клинических прояв­лений аллергоза с приемом опреде­ленного лекарственного препарата и угасание (исчезновение) их после отмены этого препарата являются осно­ванием для постановки диагноза.

Следующий этап аллергологиче­ского обследования - постановка кожных и провокационных проб с лекарственными веществами или сы­вороточными препаратами. Достоин­ства кожных проб - простота поста­новки и учета, доступность, однако кожные пробы с лекарственными ве­ществами не могут быть рекомендо­ваны для широкого применения, так как их нельзя считать абсолютно спе­цифичными и безопасными.

Различают аппликационные, капе­льные, скарификационные и внутри-кожные пробы.

Результаты кожных проб, даже вы­полняемых методически правильно, могут быть как ложноположительными, так и ложноотрицательными. Ложноположительные кожные пробы обусловливают необоснованное огра­ничение применения ряда эффектив­ных препаратов, а ложноотрицательные не гарантируют от развития ал­лергической реакции после следую­щего приема данного препарата.

Для объективной оценки положи­тельных результатов кожных проб предложены тесты с воспроизведени­ем местной эозинофилии и местного лейкоцитоза, которые позволяют ста­тистически достоверно различить ис­тинные и ложные ответы при аллерги­ческих реакциях немедленного типа.

Существуют также непрямые кож­ные тесты (проба Прауснитца-Кюстнера, Кеннеди, Урбаза-Кеннигштейна). Сущность этих во внутрикожном введении сыворотки крови больного здоровому реципиенту. По истечении времени, необходимого для фиксации антител (реагинов) в клетках кожи, в этот же участок вводят испытуемый аллерген (в пробе Кеннеди порядок введения ингредиентов обратный). При нали­чии у больного аллергии немедленно­го типа в месте введения сыворотки и аллергена развиваются гиперемия и инфильтрат.

Кожные пробы проводит специа­льно обученный средний медицин­ский персонал в амбулаторных и обычных стационарных условиях, остальные пробы - в соответствую­щих лабораториях и стационарах.

При проведении провокационных проб воспроизводят местную очаго­вую реакцию путем введения в орга­низм больного (в период ремиссии) аллергена, к которому предполагается повышенная чувствительность.

В стоматологической практике ис­пользуют следующие провокацион­ные пробы:

· подъязычную: аллерген вводят под язык и учитывают развитие воспаления слизистой оболочки рта;

· лейкопеническую: до и че­рез 20-40 мин после введения ал­лергена подсчитывают число лей­коцитов. Уменьшение его более чем на 1000 клеток в 1мм³ является показателем сенсибилизации к данному аллергену;

· тромбоцитопенический индекс, основанный на агглютина­ции тромбоцитов в перифериче­ской крови комплексами анти­ген-антитело и уменьшении их ко­личества после введения аллергена.

Следующий этап диагностики ле­карственной аллергии - лаборатор­ные исследования. Применяют клеточ­ные реакции, а для выявления специ­фических антител - следующие серо­логические реакции: микропреципитации по Уанье, преципитации в геле, агглютинации и непрямой гемагглютинации, связывания комплемента.

Неспецифические тесты:

· увеличение количества эозинофилов в отделяемом из очага воспале­ния и периферической крови;

· тромбоцито- и лейкопения вплоть до агранулоцитоза;

· увеличение содержания глобулинов в сыворотке, особенно бета- и гам­ма-глобулинов.

Достоверность этих тестов колеб­лется от 30 до 40 %.

Неспецифические тесты, позволяю­щие выявить сенсибилизацию организма к тем или иным аллергенам:

· кожная и мукозная пробы;

· клеточные тесты: реакция лейкоци-толиза, показатель повреждаемости
нейтрофилов, реакция агломера­ции лейкоцитов, индекс агглюти­нации тромбоцитов, реакция дегрануляции базофильных лейкоцитов
(по Шелли) и др.

С помощью клеточных тестов вы­являют специфические реакции сенсибилизированных клеток - лимфоци­тов, макрофагов. К группе этих методов относятся реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), реак­ция торможения миграции лейкоци­тов (РТМЛ), реакция торможения миграции макрофагов (РТММ), по­казатель повреждаемости нейтрофи­лов (ППН), прямой и непрямой базофильные тесты Шелли, тест дегрануляции тучных клеток (ТДТК).

Некоторое практическое значение в диагностике лекарственной аллер­гии имеет изучение патохимической стадии - определение в крови содер­жания гистамина, серотонина, ацетилхолина, гепарина, кининов, а так­же оценка гистамино- и серотонино-пектических свойств сыворотки кро­ви.

Сущность клеточных серологиче­ских и биохимических тестов изложе­на в специальных руководствах.

Следует отметить, что кожные про­бы и лабораторные методы исследо­вания имеют значение для диагнос­тики лекарственной аллергии только при учете данных анализа и клинических проявлений заболевания.

Для выявления сенсибилизации к микроорганизмам применяют внутрикожные пробы и лабораторные методы (РБТЛ, РТМЛ, РТММ, ППН и др.) с соответствующими бактериальными аллергенами.

1. Обследование слизистой оболочки полости рта и кожей необходимо для диагностики:

1. лейкоплаксии;

2. болезни Боуэна;

3. сифилиса;

4. многоформной экссудативной эритемы.

2. При подозрении на ВИЧ-инфекцию решающим для установления окончательного диагноза является исследование:

1. гистологическое;

2. аллергологическое;

3. серологическое;

4. биохимическое.

3. При подозрении на злокачественное новообразование на слизистой оболочке альвеолярного отростка челюсти следует провести обследование:

1. серологическое и биохимическое;

2. биохимическое и рентгенологическое;

3. рентгенологическое и цитологическое.

4. При дифференциальной диагностике травматической язвы языка и язвенной формы рака решающим является:

1. сбор анализа;

2. осмотр полости рта;

3. результаты цитологического исследования.

Правильные ответы:

1-3, 4 3-3

2-3 4-3