Ход определения. Химический контроль ценности питательных сред

Химический контроль ценности питательных сред

Применение белковых гидролизатов в качестве полноценных источников органогенов для бактерий обусловлено наличием растворимых и т. о. доступных для усвоения бактериальными клетками продуктов расщепления молекул белка: пептонов, пептидов (высоко-, средне-, низкомолекулярных), аминокислот.

Наиболее информативными и удобными для определения являются 2 показателя питательной ценности азотсодержащих (белковых) основ:

1. содержание аминного азота (NH₂) в мг % (в %) – показатель позволяет судить о глубине расщепления белковых молекул и с высокой степенью точности дает представление о питательной ценности для бактерий, т. к. последние усваивают азот только из концевой аминогруппы (т. н. «аминный азот»)

2. содержание свободного триптофана в мг % - показатель определяет абсолютное количество одной из АМК, что дает возможность судить о глубине расщепления белка.

Содержание общего и аминного азота в питательных основах

Определение аминного азота

Метод: «Формольное титрование по упрощенному методу Зеренсена-Гаврилова»

R

Это схематическое изображение белка или продукта его расщепления (пептона, полипептида, альбумозы, АМК)

NH₃⁺ ─ CH ─ COO^─

│

R

Так перемещается ион водорода в нейтральной среде (рh=7, 0), в результате образуются заряженные группы

NH₂ → NH₃⁺ ; COOH → COO^─

Аминогруппа, щелочная, карбоксильная группа, кислая,

заряжена положительно заряжена отрицательно

Амфотерные электролиты нет возможности определять количественно с помощью титрования, т. к. они одновременно имеют свойства и кислоты, и щелочи, содержат положительно и отрицательно заряженные участки. Титрационный метод станет доступным, если превратить амфотерный электролит в кислоту или щелочь. В данной методике это достигается с помощью формальдегида. При взаимодействии с формальдегидом аминогруппа белка (аминокислоты, полипептида и т. д.) связывается с карбонильной группой формальдегида. Образуются т. н. «метиленовые производные формальдегида», имеющие кислый характер (щелочная аминогруппа нейтрализована). Т. о. обеспечивается возможность оттитровать щелочью кислые карбоксильные группы, количество которых равно количеству аминогрупп, связанных с формальдегидом. Количество щелочи, ушедшей на титрование, эквивалентно количеству аминного азота (азота аминогрупп).

Принцип метода кратко: «Блокирование формальдегидом при рh 7, 0 концевых аминогрупп и титрование щелочью равного количества оставшихся свободными карбоксильныхгрупп»

Проведение исследования колориметрическим способом

(с применением индикаторов)

Реактивы

Раствор индикатора бромтимолового синего: 100 мг сухого порошка растирают в ступке с 3, 2 мл 0, 05Н раствора NaOH, переносят в мерную колбу емкостью 250, 0 мл и добавляют дистиллированную воду до метки.

Хранить укупоренным в темном стекле. Срок годности не ограничен.

Формольная смесь: к 50, 0 мл коммерческого формалина прибавляют 1, 0 мл 1 % водно-спиртового раствора фенол-фталеина (1 г фенол-фталеина + 1, 0-5, 0 мл спирта + дист. вода до 100, 0 мл). Слабо розовый цвет свидетельствует о ph 7, 0. При необходимости подщелачивают 0, 1Н или 10 % NaOH, добавляя щелочь до достижения слабо розового окрашивания.

Хранить укупоренным. Срок годности не ограничен.

Ход определения.