Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон

6.2.1 Состав:

	ферментативный перевар казеина	10 г;
	лактоза (С Н О ·Н О)	10 г;
	желчь	20 г;
	бриллиантовый зеленый	0, 0133 г,
		(или 2, 66 см раствора, приготовленного по 6.2.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
	вода	1000 см .

6.2.2 Приготовление

При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную готовую среду в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7, 2±0, 2) при температуре 25 °С. Разливают и стерилизуют среду по 6.1.2.

6.2.3 Раствор бриллиантового зеленого

6.2.3.1 Состав:

	бриллиантовый зеленый	0, 5 г;
	вода	100 см .

6.2.3.2 Приготовление

Бриллиантовый зеленый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят водой до метки.

6.3 Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки)

6.3.1 Состав бульона Мак-Конки приведен в таблице 2.


Таблица 2

Состав среды	а) Среда двойной концентрации	б) Среда нормальной концентрации
Пептон, г	40	20
Лактоза (С Н О ·Н О), г	20	10
Желчь, г	10	5
Раствор бромкрезолового пурпурового, см	2	1
Натрий хлористый, г	10	5
Вода, см	1000	1000

6.3.2 Приготовление

При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм , охлаждают до 45 °С - 55 °С и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С (7, 2±0, 1). Разливают и стерилизуют среду по 6.1.2.

6.3.3 Раствор бромкрезолового пурпурового

6.3.3.1 Состав:

	бромкрезоловый пурпуровый	1 г;
	раствор гидроокиси натрия (NaOH)=0, 1 моль/дм	19 см ;
	вода	80 см .

6.3.3.2 Приготовление

Бромкрезоловый пурпуровый переносят в фарфоровую ступку с 19 см раствора гидроокиси натрия c(NaOH)=0, 1 моль/дм и после растворения добавляют воду.

6.4 Селективная обогатительная среда (среда Кесслера)

6.4.1 Состав среды Кесслера приведен в таблице 3.


Таблица 3

Состав среды	а) Среда двойной концентрации	б) Среда нормальной концентрации
Пептон, г	20	10
Лактоза (С Н О ·Н О), г	5	2, 5
Желчь, г	10	5
Раствор кристаллического фиолетового, см	4	2
Вода, см	1000	1000

6.4.2 Приготовление

При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм , охлаждают до 45 °С - 55 °С и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °С (7, 2±0, 1).

Разливают среду по 6.1.2 и стерилизуют в автоклаве при температуре (115±1) °С в течение 20 мин.

6.4.3 Раствор кристаллического фиолетового

6.4.3.1 Состав:

	кристаллический фиолетовый	1 г;
	вода	100 см .

6.4.3.2 Приготовление

Кристаллический фиолетовый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят водой до метки.

6.5 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-агар)

6.5.1 Состав:

	ферментативный перевар животных тканей	7 г;
	дрожжевой экстракт	3 г;
	лактоза (С Н О ·Н О)	10 г;
	хлористый натрий	5 г;
	желчные соли	1, 5 г;
	нейтральный красный	0, 03 г
		(или 1 см раствора, приготовленного по 6.5.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
	кристаллический фиолетовый	0, 002 г
		(или 0, 2 см раствора, приготовленного по 6.4.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов);
	агар	12-18 г
		(зависит от желирующей способности агара);
	вода	1000 см .

6.5.2 Приготовление

Основная цель правильного приготовления среды - получение необходимой селективной способности и специфичности среды.

Тщательно размешивают компоненты или дегидратированную готовую среду в воде и оставляют на несколько минут. Устанавливают рН так, чтобы после кипения он составлял (7, 4±0, 2) при температуре 25 °С. Нагревают до кипения, помешивая время от времени. После 2 мин кипения немедленно охлаждают в водяной бане при температуре 44 °С - 47 °С. Избегают перегрева среды, не применяя вторичного нагревания. Среду не стерилизуют в автоклаве. Контролируют стерильность среды во время использования. Используют среду в течение 4 час после приготовления.

6.5.3 Раствор нейтрального красного

6.5.3.1 Состав:

	нейтральный красный	3 г;
	вода	100 см .

6.5.3.2 Приготовление

Нейтральный красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят водой до метки.