Главная страница Случайная страница
Разделы сайта
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Шаг 3. Разведите 50-кратные растворы
|
|
Подготовьте по 50 мл бутылке или пробирке для растворов антигена, первичных и вторичных антител. Подготовьте по 15 мл пробирке для образцов учеников «А» и «Б». Используйте чистую пипетку, чтобы добавить нужное количество концентрированного стокового раствора в соответствующую бутылку или пробирку.
| Раствор | Объем | Реагент | Используется для |
| 1х антиген | 24.5 мл | 1х PBS | Положительный контроль Концентрат для приготовления образцов «А» и «Б» Образец известной концентрации |
| 0.5 мл | 50x антиген | ||
| Внимание: не добавляйте раствор, содержащий Твин 20 в раствор антигена, иначе эксперимент не будет работать | |||
| 1х раствор первичных антител | 24.5 мл | Промывочный буфер | Первичные антитела |
| 0.5 мл | 50х кратный раствор первичных антител | ||
| С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте | |||
| 1х раствор вторичных антител | 24.5 мл | Промывочный буфер | Вторичные антитела |
| 0.5 мл | 50х раствор вторичных антител | ||
| Разводите вторичные антитела не ранее чем за сутки до начала работы С помощью пипетки промойте флакон с 50х раствором антител приготовленным однократным раствором, чтобы смыть остатки стокового раствора со стенок Закройте бутыль или пробирку с приготовленным раствором крышкой и хорошо перемешайте | |||
| Антиген, 125 нг/мл (раствор «А») в 15 мл пробирке | 8.75 мл | 1х PBS | Образец А |
| 1.25 мл | 1х антиген | ||
| Антиген, 25 нг/мл (раствор «Б») в 15 мл пробирке | 9.75 мл | 1х PBS | Образец Б |
| 0.25 мл | 1х антиген | ||
| Закройте 15 мл пробирки и хорошо перемешайте |
Шаг 4. Приготовьте аликвоты растворов для обеспечения всех рабочих мест
| Пробирки | Описание | Подписать | Содержимое |
| Фиолетовые пробирки, 12 шт | Положительный контроль | «+» | 0.5 мл раствора антигена (положительный контроль) |
| Синие пробирки, 12 шт | Отрицательный контроль | «-» | 0.5 мл 1х PBS |
| Зеленые пробирки, 12 шт | Первичные антитела | «П.А.» | 1.5 мл 1х раствора первичных антител |
| Оранжевые пробирки, 12 шт | Вторичные антитела | «В.А.» | 1.5 мл 1х раствора вторичных антител |
| Коричневые пробирки, 12 шт | Субстрат пероксидазы (ТМБ) | «Субстрат» | 1.5. мл раствора ТМБ |
| Внимание: ТМБ чувствителен к свету, поэтому важно хранить его именно в темных пробирках. | |||
| Желтые пробирки, 12 шт | Образец известной концентрации | «Антиген, 1000 нг/мл» | 0.25 мл 1х раствора антигена |
| Желтые пробирки, 12 шт | 1х PBS | «PBS» | 1 мл 1х PBS |
| Желтые пробирки, 12 шт | Антиген, 125 нг/мл | «А» | 0.25 мл раствора «А» |
| Желтые пробирки, 12 шт | Антиген, 25 нг/мл | «Б» | 0.25 мл раствора «Б» |
Шаг 5. Подготовьте рабочие места учеников
|
|