Прямое обнаружение антител

Тем не менее, метить каждый вид антител, который может быть использован, дорого и сложно, поэтому более обычный метод визуализации антигена – это непрямое наблюдение, основанное на использовании поликлональных вторичных антител. Вторичные антитела узнают первичные антитела, полученные из определенного животного, при этом неважно, какая у первичных антител антигенная специфичность. Таким образом, первичные антитела специфично узнают и связывают антиген, а вторичные антитела узнают и связывают первичные антитела. При этом для обнаружения всех возможных видов первичных антител, полученных в одном животном, например, в кролике, достаточно одного вида меченых вторичных антител. У этого метода есть еще одно преимущество: вторичные антитела узнают множество отдельных эпитопов на поверхности первичных антител, и с одной молекулой первичного антитела может связаться сразу несколько молекул меченого вторичного антитела, усиливая сигнал.

Непрямое обнаружение антител

Для получения вторичных антител, антитела из одного вида животных вводят другим животным. Например, если первичное антитело – это мышиное моноклональное антитело, для получения вторичных антител достаточно иммунизировать козу любым мышиным антителом. Затем козьи поликлональные анти-мышиные антитела выделяются из козьей сыворотки и сшиваются с ферментом. Вторичные антитела широко коммерчески доступны, как немеченые, так и с самыми разными химическими и ферментативными метками.