Контроли в иммунологических тестах

Для того, чтобы любому тесту можно было верить, помимо опытных образцов, он должен обязательно включать в себя контроли, то есть образцы, которые должны дать заранее известные результаты. Опытные и контрольные образцы делаются единовременно. Если у вас нету положительного контроля, а результат анализа отрицательные, как вы можете быть уверены в том, что он на самом деле отрицательный? Может быть, у вас просто не работает тест? Если положительный образец дает отрицательный результат в тесте, он называется ложноотрицательным. Аналогично, если у вас нет отрицательного контроля, а все результаты теста – положительные, как вы можете быть уверены в том, что они действительно положительные? Может быть, ваш тест был загрязнен антигеном или антителами? Если отрицательный образец дает в тесте положительный результат, он называется ложноположительным.

Зачем нужны контроли?

Положительный и отрицательный контроли являются необходимой частью любого теста. Они позволяют нам убедиться в том, что тест работает корректно. Многие диагностические тесты дают определенный процент ложноположительных или ложноотрицательных результатов, поэтому необходимо подтверждение диагноза другим исследованием. Например, иммуноферментный анализ на антитела к ВИЧ может давать как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Ложноположительные могут возникать из-за проведенных недавно вакцинаций, а ложноотрицательные – из-за подавления работы иммунной системы (например, как следствие приема иммунносупрессантов) или из-за того, что тест был проведен слишком рано и антитела в крови еще не появились. (антитела к ВИЧ в крови появляются только спустя несколько недель после заражения; процесс появления антител называется сероконверсией). Поэтому положительные результаты теста на ВИЧ всегда подтверждают вестерн-блотом.

Контроли также позволяют выявить экспериментальные ошибки. Могут возникать проблемы с реагентами, которые портятся от времени или от плохих условий хранения. Лаборанты, которые проводят тест, тоже могут взять не те реагенты, сделать ошибки в разведениях, забыть сделать промывку, и.т.п. Ошибки могут возникать и из-за плохого ведения записи результатов. Все эти вещи можно отследить, если включить в тест нужные контроли.

Давайте приступим к работе.

Вопросы до лабораторной работы

1. Как иммунная система защищает нас от болезней?

1. Как доктора используют наш иммунный ответ, чтобы защитить нас от болезней?

1. Приведите пример болезней, атакующих человеческую иммунную систему

1. Какого рода бывают нарушения работы иммунной системы?

1. Почему важно уметь определять антитела в крови людей, которые не выглядят больными?

1. Как расшифровывается ИФА?

1. Зачем в этом тесте используются ферменты?

1. Почему в тесте наряду с опытными образцами нужен положительный и отрицательный контроль?

Основные шаги в тесте ИФА для обнаружения антител:

Шаг 1: Добавить очищенный антиген в лунки плашки.. Подождите 5 минут, чтобы дать возможность молекулам антигена связаться с пластиком плашки.

Шаг 2: добавить в лунки ваши образцы сыворотки вместе с положительным и отрицательным контролями. Если в вашем образце присутствуют антитела против антигена – первичные антитела – они найдут его молекулы среди всех других молекул, и прочно свяжутся с ними.

Шаг 3: добавить соединенные с ферментом – пероксидазой вторичные антитела (антитела на антитела). Если в лунке есть первичные антитела, вторичные антитела свяжутся с ними.

Шаг 4: добавить субстрат пероксидазы, подождать 5 минут, и оценить результаты анализа. Если раствор в лунке станет синим, анализ положительный (в вашем образце присутствуют антитела к данному антигену). Если раствор останется бесцветным, анализ отрицательный.