Идентификация выделенных культур.

Отбор колоний, выделение чистой культуры

Изучают рост на элективных средах, отбирают подозрительные на парагемолитические вибрионы колонии. При количественном анализе для подсчета отбирают чашки с посевом двух последовательных разведений, где выросло не более 300 колоний. Необходимо, чтобы хотя бы в одной чашке содержалось не менее 15 колоний. С каждой из 4-х отобранных для подсчета чашек отсевают по 5 колоний. Парагемолитические вибрионы на элективной среде формируют колонии правильной округлой формы, плосковыпуклые, полупрозрачные в проходящем свете, с влажной блестящей поверхностью, размером 2 - 3 мм в диаметре, не отличающиеся по цвету от голубовато-зеленого цвета элективных сред (СЭДХ, TCBS, ДДА), т.к. вибрионы этого вида не ферментируют сахарозу, входящую в них. Подозрительные колонии отсевают на щелочной агар - питательную среду для выделения и культивирования холерного вибриона, сухую (ФС 42-213 ВС-88) и на одну из полиуглеводных сред Ресселя, Клиглера (ФС 42-3387-97) или другие с аналогичными характеристиками, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке.

На полиуглеводных средах отбирают культуры с типичным для парагемолитических вибрионов ростом. На среде Ресселя и Клиглера отмечают характерное для кислой реакции изменение цвета столбика при сохранении цвета скошенной части агара.

Культуры, выросшие на щелочном агаре, изучают на наличие цитохромоксидазы. Из оксидазопозитивных готовят мазки по Граму.

3.10.3.Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных микроорганизмов к бактериям вида V. parahaemolyticus.

Для дальнейшей идентификации отбирают оксидазопозитивные грамотрицательные культуры с характерным ростом на полиуглеводных средах. Отобранные культуры изучают по набору признаков (подвижность, лизиндекарбоксилаза, аргининдигидролаза, индол, рост в средах с различными концентрациями натрия хлорида, ферментация/окисление глюкозы на среде Хью и Лейфсона, арабинозы, сахарозы, целлобиозы, салицина, реакция Фогес-Проскауэра), методами, описанными в разделе 6 и методических указаниях МУ 4.2.1097-02 " Лабораторная диагностика холеры".

При расследовании случаев заболевания, обусловленных V. раrаhaemolyticus, выделенные культуры изучают по расширенному набору признаков, а также по тестам внутривидовой дифференциации: серотипированию и феномену Канагава.

Свойства парагемолитических вибрионов и сходных с ними микроорганизмов

Условные обозначения: + положительный результат в 90%; - отрицательный результат в 90%; +/- признак вариабелен; +(-) или -(+) в скобках - редко наблюдаемый результат; * - V. anguillarum реклассифицирован в Listonella anguillarum (Mcc Donell M.T., Colwell R.R., 1985), является возбудителем инфекционного заболевания рыб и других гидробионтов, обитающих в соленых и реже - в пресных водоемах. Роль в патологии человека микроорганизмов этого вида не установлена; О/Ф тест окисления / ферментации глюкозы в среде Хью-Лейфсона.