Идентификация белковых веществ химическими методами

1) Биуретовая реакция (на пептидную связь в белках)

2 мл раствора белка нагревают с 2 мл 20%-го раствора едкого кали или натра и несколькими каплями раствора сульфата меди(II). Появляется фиолетовое окрашивание вследствие образования комплексных соединений меди с белками.

2) Нингидриновая реакция (на α -аминокислоты)

В пробирку наливают 1 мл 1%-го раствора глицина (является α -аминокислотой) и 0, 5 мл 1%-го раствора нингидрина. Содержимое пробирки осторожно нагревают до появления сине-фиолетового окрашивания.

3) Реакция с формальдегидом (на α -аминокислоты)

В пробирку наливают 5 капель 1%-го раствора глицина и прибавляют 1 каплю индикатора метилового красного. Раствор окрашивается в желтый цвет (нейтральная среда). К полученной смеси добавляют равный объем 40%-го раствора формальдегида (формалин). Появляется красное окрашивание (кислая среда).

Эта реакция лежит в основе количественного определения α -аминокислот методом формального титрования (метод Сёренсена).

4) Реакция комплексообразования с солями тяжелых металлов (на α -аминокислоты)

В пробирку наливают 3 мл 3%-го раствора сульфата меди(II), добавляют несколько капель 10%-го раствора гидроксида натрия до образования голубого осадка. К полученному осадку гидроксида меди(II) приливают 0, 5 мл концентрированного раствора глицина. Образуется темно-синий раствор глицината меди.

5) Реакция Сакагучи (на аминокислоту аргинин)

В пробирку наливают 2 мл 0, 01%-го раствора аргинина, затем добавляют 2 мл 10%-го раствора едкого натра и несколько капель 0, 2% спиртового раствора α -нафтола. Содержимое пробирки хорошо перемешивают, приливают 0, 5 мл раствора гипобромита и вновь перемешивают. Немедленно добавляют 1 мл 40%-го раствора мочевины для стабилизации быстро развивающегося оранжево-красного окрашивания.

6) Реакция Фоля (на аминокислоты цистеин и цистин)

В пробирку наливают 1 мл раствора цистеина, прибавляют 0, 5 мл 20%-го раствора гидроксида натрия. Смесь нагревают до кипения, а затем добавляют 0, 5 мл раствора ацетата свинца(II). Наблюдается выпадение серо-черного осадка сульфида свинца(II).

7) Реакция Циммермана (на аминокислоту глицин)

К 2 мл 0, 1%-го раствора глицина, доведенного добавлением 10%-го раствора щелочи до рН = 8, приливают 0, 5 мл водного раствора о-фталевого диальдегида. Реакционная смесь начинает медленно окрашиваться в ярко-зеленый цвет. Через несколько минут выпадает зеленый осадок.

8)Ксантопротеиновая реакция (на α -аминокислоты, содержащие ароматические радикалы, – триптофан, фенилаланин, тирозин)

В пробирку наливают 1 мл раствора тирозина и добавляют 0, 5 мл концентрированной азотной кислоты. Смесь нагревают до появления желтой окраски. После охлаждения добавляют 1 мл 20%-го раствора гидроксида натрия до появления оранжевой окраски раствора.

9) Реакция Адамкевича (на аминокислоту триптофан)

К 1 мл раствора триптофана прибавляют 1 мл глиоксиловой кислоты и 0, 5 мл серной кислоты. Наблюдается фиолетовое окрашивание раствора.

10) Осаждение белка солями тяжелых металлов

В две пробирки наливают по 1–2 мл раствора белка и медленно, при встряхивании, добавляют по каплям в одну пробирку насыщенный раствор сульфата меди, а в другую – 20%-й раствор ацетата свинца. Образуются осадки труднорастворимых солеобразных соединений белка.

11) Открытие аминного азота в белках

В сухую пробирку помещают немного сухого белка и прибавляют пятикратное количество натронной извести (смесь едкого натра и гидроксида кальция), перемешивают встряхиванием и подогревают. Выделяется аммиак, вызывающий посинение розовой лакмусовой бумаги, смоченной водой. Одновременно ощущается запах жженого волоса, что всегда наблюдается при сжигании белковых веществ.

12) Открытие серы в белках

В пробирку наливают около ~0, 5 мл раствора уксуснокислого свинца и прибавляют раствор едкого кали до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца. В другую пробирку наливают ~2–3 мл раствора белка и приливают такой же объем полученного раствора плюмбита. Нагревают смесь до кипения в течение 2–3 мин. Появление темного окрашивания указывает на образование сульфида свинца. [9]