Наименование работ

РАБОТА 1. Определение гемагглютинирующих антител в сыворотке крови кролика, сенсибилизированного нормальной лошадиной сывороткой (реакция пассивной гемагглютинации по Бойдену)

Этапы проведения реакции:

1. Подготовка эритроцитов барана к адсорбции на них аллергена

2. Адсорбция аллергена на танизированных эритроцитах

3. Подготовка сыворотки сенсибилизированного животного

4. Проведение реакции

1. Подготовка эритроцитов барана к адсорбции на них аллергена.

Приготовить взвесь из промытых физиологическим раствором эритроцитов в буферном растворе с рН 7, 2. Для этого в центрифужную пробирку к 0, 1 мл взвеси эритроцитов добавить 3, 9 мл буферного раствора. Эритроциты танизируют: к 4 мл 2, 5% взвеси эритроцитов добавить равное количество раствора танина в разведении 1: 20000. Взвесь тщательно перемешать стеклянной палочкой и поместить на 10 мин в термостат при температуре 37⁰С. Пробирку с танизированными эритроцитами центрифугировать 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удалить пастеровской пипеткой. К осадку добавить 4 мл буферного раствора с рН 7, 2 и перемешать стеклянной палочкой.

2. Адсорбция аллергенов на танизированных эритроцитах.

Аллерген (нормальная лошадиная сыворотка) развести в буферном растворе с рН 6, 4. Для этого к 0, 5 мл аллергена добавить 4, 5 мл буферного раствора. К 3 мл раствора разведенного аллергена добавить 1, 5 мл взвеси танизированных эритроцитов и поместить в термостат на 10 мин при температуре 37⁰С. Пробирку со взвесью центрифугировать в течение 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удалить пастеровской пипеткой. К осадку добавить1, 5 мл буферного раствора с рН 6, 4, перемешать стеклянной палочкой.

3. Подготовка сыворотки крови сенсибилизированного кролика.

Сыворотку крови сенсибилизированного нормальной лошадиной сывороткой кролика развести буферным раствором с рН 7, 2 в следующих разведениях – 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1: 16, 1: 32, 1: 64.

4. Постановка реакции.

Взять 7 обезжиренных предметных стекол. На первое стекло нанести каплю буферного раствора с рН 7, 2; на остальные стекла нанести по 1 капле иммунной сыворотки кролика в указанных выше разведениях. Рядом с этими каплями нанести по капле взвеси эритроцитов с адсорбированным аллергеном. Капли перемешать стеклянной палочкой. Через 5 мин под микроскопом наблюдать агглютинацию эритроцитов. Титром антител считать то наибольшее разведение сыворотки, которое дает положительную реакцию агглютинации в первые 5 мин. Результаты проанализировать и сделать выводы.

ЗАНЯТИЕ 26. Патохимическая и патофизиологическая