Введение. Персонализированная клеточная терапия вирусных и невирусных заболеваний переднего отрезка глаза с использованием активированных аутологичных лейкоцитов

Персонализированная клеточная терапия вирусных и невирусных заболеваний переднего отрезка глаза с использованием активированных аутологичных лейкоцитов периферической крови.

(медицинская технология)

Москва 2014

Аннотация

Метод персонализированной клеточной терапии с использованием активированных аутологичных лейкоцитов периферической крови предназначен для лечения больных с различными поражениями тканей переднего отдела глаза (воспалительной, посттравматической, постоперационной и дистрофической природы).

Метод выполняется врачами офтальмологами в условиях стационара.

Патенты

Патент РФ № 2357743 «Средство для лечения, способ получения средства для лечения и способ лечения отека роговицы и других проявлений ранней буллезной кератопатии», опубликовано 10.06.2009

Патент РФ №2165747 «Способ лечения поствоспалительной буллезной кератопатии», опубликовано 27.04.2001

Авторы:

Аветисов С.Э., Каспаров А.А., Фадеева Л.Л., Каспарова Евг. А., Каспарова Ел. А., Павлюк А.С., Суббот А.М..

Составители документа:

Каспарова Евг. А., Павлюк А.С., Суббот А.М..

Введение.

Сегодня во всем мире интенсивно развивается такая область, как клеточная терапия, в том числе и в офтальмологии [1, 2, 3, 4].

В ФГБУ НИИ глазных болезней РАМН был предложен и с успехом используется новый метод клеточной терапии (КТ), ранее называвшийся локальной экспресс-аутоцитокинотерапией (ЛЭАЦКТ) [4, 5] для лечения больных с различными поражениями тканей переднего отдела глаза воспалительной, посттравматической, постоперационной и дистрофической природы [6, 7]. Метод данной клеточной терапии основан на введении непосредственно в зону патологического процесса лейкоцитов пациента в аутологичной сыворотке, активированных in vitro комплексом полиадениловой – полиуридиловой кислот (полиА: У) – это структурный аналог двухспиральной вирусной РНК, реализующий свое действие через Toll-like рецепторы 3 и 7 типа (препарат Полудан) [8]. Кроме того, на клетки оказывают активирующее влияние и другие процессы – свертывание крови, имитирующее течение раневого процесса, температура 37°С, увеличивающая интенсивность синтетических процессов.

Мы провели ряд исследований, в результате которых было установлено, что предлагаемый метод сбора клеток в аутологичной сыворотке вокруг сгустка свернувшейся крови, позволяет получить клеточный препарат (КП) с высоким содержанием жизнеспособных клеточных элементов, из 8 мл крови можно получить 2-4 мл КП с концентрацией ядросодержащих клеток 3× 106 кл/мл и жизнеспособностью 70-90%. Было исследовано, какие именно клеточные популяции входят в состав КП [20].

В результате проведенных исследований выяснено, что наблюдающийся высокий терапевтический эффект обусловлен наличием в используемом клеточном препарате синтезированных за время инкубации биологически активных веществ, и клеточными элементами, служащими с одной стороны, продуцентами цитокинов и факторов роста, а с другой, обладающими способностью активно воздействовать на элементы тканевой ниши путем межклеточных взаимодействий и дифференцировки [20, 9, 10, 11, 12, 13].

Нами было проведено определение в составе КП, биологически активных веществ – цитокинов и факторов роста, которые могут играть центральную роль в механизмах реализации его терапевтических эффектов. Значения приведены в таблице 1.

Таблица 1 Концентрация цитокинов и факторов роста в клеточном препарате (пг/мл, М±sd, в скобках – число наблюдений).

Установлено что цитокиновый профиль КП формируется за счет цитокинов:

1. выделенных в ответ на стимуляцию полиА: У (ИФ-α, ИЛ-1, -6, ФНО-α);

2. спонтанно синтезированных за время инкубации (ИЛ-8);

3. предсуществующих в плазме и сыворотке крови (TGF-β 1, PDGF-AB, TGF-β 2, VEGF, ИФ-γ и ИЛ-4).

Можно предположить, что при проведении интракамеральной ПКТ и замене водянистой влаги передней камеры глаза на КП, наблюдаются явления, аналогичные полученным в культуре эндотелиоцитов: PDGF ускоряет заживление раневого дефекта; TGF-β 1 приводит к стимуляции пролиферации клеток, усилению продукции коллагена и выработке эндогенного b-FGF эндотелиоцитами, который, в свою очередь, защищает клетки от апоптоза; VEGF стимулирует миграцию эндотелиоцитов в зону повреждения.

Известно, что и другие обнаруженные цитокины играют роль в процессах регенерации. Так, ФНО-α регулирует процессы фиброгенеза в поврежденной роговице, ИЛ-1 индуцирует синтез b-FGF эндотелиоцитами после деструкции роговицы [28, 29]. Провоспалительные цитокины ослабляют межклеточные контакты между эндотелиоцитами, чем, предположительно, стимулируют эндотелий роговицы к делению, снимая один из механизмов его ингибирования [20].

Результаты определения цитокинового спектра КП позволили разработать схему предполагаемого механизма лечебного действия ПКТ (рис.1).

Рисунок 1. Предполагаемые цитокиновые механизмы реализации лечебных эффектов ПКТ.

Выделившиеся в результате стимуляции полиА: У провоспалительные цитокины, вкупе с ИЛ-8, ослабляют межклеточные контакты, чем снимают контактное ингибирование митоза, позволяя эндотелиоцитам поделиться или мигрировать и закрыть зону дефекта. Антиапоптотическому эффекту способствует наличие факторов роста, концентрация которых в водянистой влаге в норме снижена, они, кроме того, усиливают синтез внеклеточного матрикса, что стабилизирует барьерную функцию эндотелия. Прямой противовирусный эффект обеспечивается наличием в КП ИФα.

В настоящее время в клинической офтальмологии с лечебной целью используют комплекс естественных гетерологичных цитокинов (препарат Суперлимф) полученный при стимуляции клеток крови свиньи лабораторным диагностикумом фитогемагглютинином (ФГА) [14], либо методику локальной иммунокоррекции комплексом человеческих аутологичных цитокинов, полученных с использованием ФГА [15].

Оба эти метода имеют определенные терапевтические ограничения, связанные с необходимостью длительных и дорогостоящих процедур для изготовления и контроля качества препаратов. Кроме того, многолетний опыт подтверждает более высокую эффективность человеческого интерферона по сравнению с гетерологичными.

Вышеуказанные обстоятельства исключают более радикальные пути введения перечисленных препаратов, ограничивая их использование в виде инстилляций в конъюнктивальную полость.

За рубежом уже довольно длительное время с успехом используют инстилляции сыворотки (как аутологичной, так и полученной из пуповинной крови) в коньюнкивальную полость для лечения персистирующих эрозий роговицы [16, 17, 18].

Преимущества ПКТ заключаются в его простоте – во-первых, этот метод можно осуществлять в условиях клиники, во-вторых – есть возможность использования приготовленного препарата не только в виде инстилляций, но и более радикально – в виде субконъюнктивальных, парабульбарных, ретробульбарных и интракамеральных инъекций, так как использующийся индуктор синтеза цитокинов (Полудан) разрешен к внутриглазному введению.

На сегодняшний день метод ПКТ применяется в НИИ глазных болезней РАМН в рамках научно-исследовательской работы. Внедрение этой медицинской технологии в практическое здравоохранение позволит значительно сократить сроки лечения больных с тяжелыми вирусными поражениями переднего отрезка глаза, незаживающими, эрозиями роговицы, ожогами I-II степени тяжести, а также позволит отложить или даже совсем избежать пересадки роговицы больным с ранней послеоперационной буллезной кератопатией.