Схема работы 2 дня. Проводят пересев с жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после термостатной выдержки исследуют на присутствие колоний типичных или

• Учёт первичного посева: определяют величину, форму, количество – в крестах. Если на элективных или накопительных средах характерного для бактерий сальмонеллы роста, то лаборатория даёт предварительный ответ об отсутствии сальмонелл. Если выросли – то среды обогащения уже не нужны. Дальнейшие исследования проводят с элективных сред: бактериоскопию, определение подвижности (метод «висячей» капли)

3 этап - обогащения

Проводят пересев с жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после термостатной выдержки исследуют на присутствие колоний типичных или подозрительных на сальмонелл.

4 этап – подтверждение наличия бактерий рода сальмонелл определением морфологических, биохимических и серологических свойств.

При наличии роста на питательных средах берут 3-5 подозрительных колоний с каждой чашки. Из части колоний делают мазок, окрашивают по Грамму, микроскопируют. Одновременно исследуют на подвижность в висячей капле. Оставшуюся часть используют для приготовления взвеси, которую используют для биохимической и серологической типизации.

Сальмонеллы относятся к одному из 12 родов семейства бактерий Enterobacteriacae, систематизировано около 2000 серотипов сальмонелл. Морфологически это палочки с закруглёнными концами, иногда овальной формы, дл. 2-4 и ширина -0, 5 ммк, подвижны (кроме птичьего), по грамму окрашиваются отрицательно, спор и капсул не образуют. Аэробы или факультативные анаэробы. Растут при 37⁰С, но при низких температурах не теряют жизнеспособности. Вместе с большой общностью морфологических и культуральных характеристик, а также токсинообразования, эти бактерии отличаются друг от друга по биохимическим и антигенным (серологическим) свойствам. Эти различия и положены в основу методов типизации.

Существую два основных метода типизации: серологический и биохимический.

Серологическая типизация – используют реакцию аглютинизации с сальмонелёзными сыворотками. Сальмонеллы имеют два вида антигенов: термостабильный О-антиген (соматический, связанный с телом бактерий) и термолабильный Н – антиген (жгутиковый, связан с двигательным аппаратом бактерий). По различию в строении О- и Н- антигенов у отдельных видов сальмонелл их разделили на несколько серологических групп – А, В, С, Д, Е, и т.д. Каждый вид бактерий, входящих в определённую серологическую группу, будет агглютинироваться с сывороткой, приготовленной с помощью иммунизации животного культурой любой бактерии, входящей в данную группу. Такие сыворотки называют групповыми, а реакцию – групповой. Положительная реакция агглютинации при постановке её с пятью групповыми сыворотками (АВСДЕ), указывает на принадлежность бактерий к роду сальмонелла.

Существуют также - специфические монорецепторные сыворотки. Реакция агглютинизации с монорецепторными сыворотками позволяет типизировать представителей этих бактерий – до вида.

Биохимическая типизация основана на различии у сальмонелл определённых ферментов. Одни бактерии способны разлагать те или иные углеводы или спирты, а другие такой способностью не обладают. При биохимической типизации применяют элективные среды и цветной (пёстрый) ряд сред. Каждая из таких сред имеет в составе ингредиенты: сахар или спирт, а также индикатор, по изменению цвета которого можно судить о разложении ингредиента. С помощью элективных сред и малого «пёстрого» ряда можно дифференцировать от бактерий рода Е. соли, а также определить вид сальмонеллёзных бактерий.

Среда Эндо содержит сахар – лактоза, а индикатор – фуксин, обесцвеченный сернистокислым натрием. Бактерии кишечной палочки разлагают лактозу, а сальмонеллёзные не разлагают, при разложении лактозы образуется молочная кислота, которая восстанавливает красный цвет фуксина. Колонии кишечной группы на среде Эндо красно - фиолетового цвета с металлическим блеском, сальмонеллы растут в виде полупрозрачных колоний светло-розового цвета с голубоватым оттенком. Далее применяют малый и большой «пёстрый» ряд сред.

Среда Грисса с различными сахарами и многоатомными спиртами, бульон с глицерином (по Штерну), молоко, мясо-пептоновый бульон. Принадлежность культуры к определённому виду бактерий по изменению сред пёстрого ряда устанавливают по схеме.

На 2 день можно дать предварительное заключение о наличии сальмонеллёза на основании:

1. характерных колоний на элективных средах;
2. выявлении грам (-) палочек в мазках-отпечатках;
3. при выявлении подвижности;
4. при (+) пробной реакции аглютинизации.