Информационный блок. Овладеть основными методами и практическими навыками приготовления гистологических препаратов, их изучения под световым микроскопом

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ

Овладеть основными методами и практическими навыками приготовления гистологических препаратов, их изучения под световым микроскопом, объективной количественной оценки микроструктур в связи с широким использованием в клинической практике врачей, патологоанатомов, судебных медиков и экспериментальных исследованиях.

ИНФОРМАЦИОННЫЙ БЛОК

Ключевые слова и понятия: гистологический микропрепарат, гематоксилин-эозиновая окраска, базофилия, эозинофилия, световой микроскоп, электронный микроскоп.

Для изучения гистологических препаратов необходимо взять и зафиксировать материал (биоптат), приготовить срезы, окрасить парафиновые срезы гематоксилин-эозином:

I. Депарафинирование:

1) удаление парафина из срезов в трех порциях ксилола по 3-5 мин. в каждом;

2) удаление из срезов ксилола с помощью 100 гр. спирта – 2-3мин.;

3) удаление из срезов спирта с помощью дист. воды – 1-2мин.

II. Окрашивание срезов:

1) помещение среза в водный раствор гематоксилина – 2-3мин.;

2) затем в водопроводную воду – 5-10мин.;

3) в дистиллированную воду – 2-5 мин.;

4) в водный раствор эозина – 1мин.;

5) в дистиллированную воду – 1мин.

III. Обезвоживание срезов и заключение в бальзам:

1) обезвоживание срезов в 70 гр., затем в 96 гр. спиртах по 1-2мин.;

2) просветление срезов в ксилоле – 2мин.;

3) заключение срезов в бальзам.

Окрашенные микропрепараты можно исследовать под световым микроскопом. Существует множество методик окрашивания препаратов на гликоген, нервные элементы, жир, ДНК и т. д. Для обзорных исследований используется окраска гематоксилин-эозином, при которой оксифильные структуры окрашиваются в розовый цвет кислым красителем, а базофильные структуры в синий цвет основным красителем. Под световым микроскопом на срезе можно отличить «базофильные» и «оксифильные» структуры, идентифицировать ядра различной формы и размеров в разных типах клеток.

Световой микроскоп состоит из трех основных частей: механи­ческой, оптической и осветительной. В механическую часть микроско­па входят штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и мик­рометрические винты (позволяют поднимать и опускать тубус) К осве­тительной части микроскопа относятся зеркало, служащее для на­правления светового пучка на объект. Оптическая часть микроскопа состоит из окуляров и объективов. На окуляре и объективе имеются циф­ры, показывающие увеличение. Чтобы узнать увеличение объекта, не­обходимо перемножить цифры на окуляре и объективе.

Правила работы с микроскопом на малом увеличении:

1. Поставьте микроскоп слева, штативом к себе и предметным столиком от себя.

2. Движением пластинки револьвера подведите до фиксации под тубус объектив малого увеличения (" 8х").

3. Вращением макрометрического винта поставьте объектив (" 8х") на расстоянии 1 см от предметного столика микроскопа.

4. Установите вогнутое зеркало. Смотрите в окуляр левым гла­зом, правый не закрывайте. Большим и указательным пальцем (не зак­рывая поверхность зеркала) поворачивайте зеркало к источнику света до максимального освещения поля зрения.

5. Положите препарат покровным стеклом вверх на предметный столик микроскопа так, чтобы объект совпадал с осью объектива.

6. Макрометрическим винтом опустите объектив малого увеличе­ния на расстояние 0, 5 см от препарата. Смотрите сбоку!

7. Смотрите в окуляр. Движением макрометрического винта к себе плавно поднимите тубус до появления четкого изображения препарата.

Правила работы, с микроскопом на большом увеличении:

1. Только после нахождения объекта на малом увеличении и по­становки интересующей детали в центр поля зрения можно изучать препарат на большом увеличении. Двигать препарат после установки на малом увеличении нельзя!

2. Вращением пластинки револьвера смените объектив " 8х" на объек­тив " 40х".

3. Очень медленно, глядя в окуляр, поднимите тубус макрометри­ческим винтом до появления изображения объекта.

4. Четкость изображения получите с помощью микрометрическо­го винта, вращая его вперед или назад на пол-оборота.

5. Изучите препарат и зарисуйте.

6. После окончания работы снимите препарат с предметного столи­ка. Замените объектив " 40х" на " 8х".

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1. Цель окрашивания гистологического препарата.

2. Группы красителей, используемых в гистологической практике.

3. Какие структуры при окрашивании называются «оксифильными» и «базофильными».

4. Методы изучения клетки.

5. Увеличительные приборы: лупа, световой микроскоп, электронный микроскоп.

6. Устройство светового микроскопа, принцип работы.

7. Правила работы с микроскопом на малом увеличении.

8. Правила работы с микроскопом на большом увеличении.