Методы подсчета количества эритроцитов в крови

Унифицированы 2 метода подсчета количества эритроцитов в крови:

- в счетной камере;

- в автоматическом счетчике.

Унифицированный метод подсчета количества эритроцитов крови в счетной камере

Принцип. Подсчитывают эритроциты под микроскопом в определенном объеме счетной камеры при постоянном разведении крови.

Реактив: 0, 9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор).

Специальное оборудование: микроскоп, счетная камера Горяева.

Ход определения. В чистую сухую пробирку с помощью мерной пипетки или автоматического дозатора наливают точно 4мл физиологического раствора и 0, 02мл (капилляр Сали) крови. Промывают капилляр раствором 2-3 раза и перемешивают содержимое пробирки - при этом получается разведение крови в 200 раз. Оставляют до момента счета, но не более 2-3 часов. При подозрении на анемию подсчет проводят тотчас же после взятия крови, так как эритроциты при некоторых видах анемий быстро разрушаются. Подготавливают к работе камеру Горяева. Ещё раз тщательно перемешивают содержимое пробирки и заполняют этой смесью камеру Горяева с помощью пастеровской пипетки или стеклянной палочки с оплавленным концом. Оставляют заполненную счетную камеру на 1 минуту в горизонтальном положении для оседания эритроцитов. Подсчитывают эритроциты в 5 больших квадратах, разграфленных каждый на 16 малых квадратов и расположенных по диагонали сетки Горяева. Таким образом, считают эритроциты в 80 малых квадратах. Счет начинают с левого верхнего угла сетки и ведут при условиях: конденсор опущен, окуляр 10Х или 15Х, объектив 8Х. При подсчете эритроцитов руководствуются теми же правилами, что и при подсчете лейкоцитов, то есть считают все клетки, находящиеся внутри квадрата и на разграничительных линиях, если они большей частью заходят внутрь квадрата. Клетки же, пересеченные разграничительной линией точно пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах квадрата (например, левой и верхней).

Расчет. Количество эритроцитов в 1мкл крови рассчитывают по формуле:

, где

- количество эритроцитов в 1мкл крови;

а - количество эритроцитов, подсчитанных в 80 малых квадратах,

4000 – коэффициент перевода объема на 1мкл (объём одного малого квадрата равен мкл); 200 – разведение крови; 80 – количество сосчитанных малых квадратов.

Чтобы перевести содержание эритроцитов в единицы СИ (1л крови), количество эритроцитов в миллионах умножают на 10¹². Практически для определения содержания эритроцитов в 1л крови количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, делят на 100 (то есть переносят запятую на 2 знака влево) и умножают на 10¹².

Подсчет эритроцитов в счетной камере является трудоемким и недостаточно точным методом. На результатах подсчета сказываются малейшая неточность при взятии крови в капилляр, недостаточное перемешивание крови с 0, 9% раствором NaCl, любое отклонение от правил подготовки счетной камеры, её заполнения и подсчета клеток, а также недоброкачественность реактива и мокрая или грязная посуда (пробирки, пипетки, капилляры).