Унифицированный метод подсчета количества лейкоцитов крови в счетной камере

Принцип. Подсчитывают лейкоциты под микроскопом в определенном объеме счетной камеры при постоянном разведении крови после разрушения эритроцитов.

Реактив: 3-5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный водным раствором метиленового синего для окраски ядер лейкоцитов и облегчения их подсчета. Раствор голубого цвета, стойкий при хранении.

Специальное оборудование: микроскоп, счетная камере Горяева.

Ход определения. В агглютинационную пробирку с помощью мерной пипетки или автоматического дозатора наливают точно 0, 4мл раствора уксусной кислоты и вносят в него 0, 02мл (капилляр Сали) крови. Промывают капилляр несколько раз раствором кислоты и перемешивают содержимое пробирки. При этом получается разведение крови в 20 раз. Оставляют до момента счета, но не более 2-4 часов после забора крови. Подготавливают к работе камеру Горяева, притирая покровное стекло так, чтобы появились радужные кольца. Ещё раз тщательно встряхивают содержимое пробирки и заполняют этой смесью камеру Горяева с помощью пастеровской пипетки или стеклянной палочки с оплавленным концом. Оставляют заполненную счетную камеру на 1 минуту в горизонтальном положении для оседания лейкоцитов. Подсчитывают лейкоциты в 100 больших не разграфленных квадратах счетной камеры при условиях: конденсор опущен, окуляр 10х или 15х, объектив 8х. Счет начинают от левого верхнего угла сетки камеры Горяева. При подсчете лейкоцитов руководствуются правилом: считают все клетки, находящиеся внутри квадрата и на разграничительных линиях, если они большей частью заходят внутрь квадрата. Клетки же, пересеченные разграничительной линией точно пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах квадрата (например, левой и верхней).

Расчет. При расчете количества лейкоцитов в 1мкл крови используют формулу:

, где

- количество лейкоцитов в 1мкл крови;

а - количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах;

4000 – коэффициент перевода объема на 1мкл, исходя из объёма малого квадрата, который составляет мкл;

1600 – количество сосчитанных малых квадратов;

20 – разведение крови.

Для перевода количества лейкоцитов в единицы СИ (в 1л крови) полученную цифру умножают на 10⁶.

Практически для определения содержания лейкоцитов в 1л крови количество лейкоцитов, подсчитанное в 100 больших квадратах счетной камеры, умножают на 50, делят на 1000 (то есть переносят запятую на 3 знака влево) и умножают на 10⁹.