Главная страница Случайная страница
Разделы сайта
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатикаИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторикаСоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансыХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника
Экспресс-определение этиленгликоля в моче и плазме, крови методом газовой хроматографии
|
|
Этиленгликоль относится к группе «летучих ядов», но имеет очень высокую температуру кипения (см. табл. 6). Поэтому для проведения исследования этиленгликоля газохроматографическим методом необходимо использовать метод прямого ввода пробы и прибор, снабженный пламенно-ионизационным детектором.
Обнаружение: 2-3 мкл мочи или плазмы крови или извлечения из органов вводят в колонку хроматографа. Чувствительность прибора устанавливается таким образом, чтобы при хроматографировании метчика - 100 мг % (16 ммоль/л) раствора этиленгликоля на хроматограмме регистрировался пик высотой не менее 5 см. При условиях исследования биожидкостей на хроматограмме фиксируются и самые низкие токсические концентрации этиленгликоля, идентификация которого осуществляется по абсолютному времени удержания, совпадающему с метчиком.
Условия газохроматографического определения: газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором, колонка стеклянная, длиной 1, 2 м, внутренним диаметром 3 мм, насадка - Separon BD (100 мкм) или Porapak Q-S (80-100 мкм), газоноситель - гелий со скоростью 45 мл/мин, температура колонки при использовании сепарона 180 °С, порапака 200 °С, температура испарителя 220 °С.
5 мкл мочи вводят в испаритель газового хроматографа марки «Цвет-110». Детектор ионизационно-пламенный, колонка № 1 - реоплекс-400 R на хроматоне 0, 16-0, 20 мм, колонка 2-апиезон L на хроматоне N-AW 0, 16-0, 20 мм, температура термостата - 170 °С, температура испарителя - 220 °С, расход газов: азота - 30 мл/мин, водорода - 30 мл/мин, воздуха - 300 мл/мин, предел чувствительности - 10x10, скорость движения диаграммной ленты - 720 мм/час. Время удерживания этиленгликоля на колонке № 1 - 36 мм, на колонке № 2 - 15 мм.
Таблица 6
Время удерживания (мин) важнейших растворителей (водные растворы) на Separon BD, колонка 0, 3x12 см, температура колонки 180 °С, скорость газа носителя — 4 мл/мин
| Растворитель | Т кип (°С) | tабс (мин) |
| Метанол | 67.7 | 0.50 |
| Этанол | 78.4 | 0, 82 |
| Ацетон | 56.2 | 1.27 |
| Хлористый метилен | 40.0 | 1, 27 |
| Изопропанол | 82.5 | 1, 33 |
| Эфир диэтиловый | 36, 5 | 1, 53 |
| Пропанол | 97.8 | 1, 67 |
| Хлороформ | 61.2 | 2.33 |
| Этилацетат | 2, 50 | |
| Гексан | 68, 8 | 2, 67 |
| Дихлорэтан | 83, 5 | 3, 17 |
| Чегырёххлористый углерод | 76, 8 | 3, 17 |
| Изобутанол | 107, 5 | 3, 17 |
| Бензол | 80.1 | 3, 50 |
| Метилцеллозоль | 124.6 | 3, 67 |
| Трихлорэтилен | 87.2 | 3, 67 |
| Бутанол | 117.4 | 4, 00 |
| Этиленгликоль | 197, 6 | 5, 17 |
| Этшщеллозоль | 134.8 | 6.33 |
| Толуол | 110.6 | 7.33 |
| Изоамиловый спирт | 119, 9 | 7, 33 |
| 1, 2-Пропиленгликоль | 8, 00 | |
| Амиловый спирт | 138, 0 | 8, 33 |
| Бутилацетат | 125, 0 | 11, 67 |
| М-Ксилол | 139, 7 | 14, 26 |
| О-Ксилол | 144, 4 | 15.56 |
| Тетрагидрофурфуриловый спирт | 177, 5 | 20.00 |
| Фенол | 188, 7 | 28, 00 |
| Диэтиленгликоль | 244.8 | 41, 67 |
| Этилкарбитол | 201, 9 | 55, 00 |
Указанные соединения не мешают определению этиленгликоля. Порядок выхода перечисленных растворителей на Paropak Q-S аналогичен.
Следует отметить, что при исследовании биологических объектов на хроматограммах, как правило, регистрируется фоновый пик со временем удержания, приблизительно равным половине времени удержания этиленгликоля и также не мешающий его определению.
Чувствительность обнаружения этиленгликоля в объектах исследования - 10 мг/% (1, 6 ммоль/л). При содержании этиленгликоля в биологических жидкостях свыше 50 мг % (8 ммоль/л), его количественное определение может проводиться непосредственно в объектах, минуя стадию предварительного изолирования яда.
Разработанные методики позволяют определить этиленгликоль в присутствии других гликолей, в том числе и пропиленгликоля. При гнилостно-разложившемся биоматериале данный метод исследования не используют.
Количественное определение этиленгликоля проводят методом внутреннего стандарта с использованием пропиленгликоля. В случае обнаружения в биологическом материале пропиленгликоля внутренним стандартом является н-бутанол. В пенициллиновом флаконе тщательно смешивают равные объемы исследуемого объекта (моча, плазма крови или извлечение из мочи, крови, внутренних органов и внутреннего стандарта (3% раствор пропиленгликоля). 2-3 мкл смеси вводят в колонку газового хроматографа при описанных выше условиях. Расчет концентрации этиленгликоля в исследуемом объекте производят по предварительно построенному калибровочному графику зависимости отношения высот пиков этиленгликоля и пролиленгликоля от концентрации этиленгликоля. Калибровочные графики, построенные на водных растворах этиленгликоля, растворам этиленгликоля в плазме крови и моче, практически совпадают между
собой, что не требует введения поправочных коэффициентов при расчете содержания этиленгликоля в биологических жидкостях по калибровочному графику, построенному по водным растворам. В случаях проведения количественного определения в извлечениях расчет концентрации этиленгликоля в крови, моче и внутренних органах осуществляется по формуле:
Сэг = Сэг · V · 100 / (n · 100),
где Сэг - концентрация этиленгликоля в крови, моче или внутренних органах, мг % (или моль/л);
Сэг - концентрация этиленгликоля в водном извлечении, мг % (или ммоль/л);
V - объём водного извлечения, мл;
n - объём крови или мочи, взятый для определения, мл, или навеска органа, г;
% - усреднённый процент выхода этиленгликоля по методике: для мочи - 73%, для крови - 62%, для внутренних органов - 42%.
|
|