Засев носителя поверхностной культурой

В качестве носителя для иммобилизации мицелия гриба данным способом были выбраны губки из нержавеющей стали.

Губки из нержавеющей стали были порезаны на кусочки диаметром приблизительно 1, 5 см. Перед использованием носитель был подвержен кипячению в течение 10 мин, а затем трижды промыт дистиллированной водой.

Носитель был подвержены стерилизации в автоклаве при температуре 121 º С в течение 40 мин.

Иммобилизацию продуцента осуществляли в колбах Эрленмейера объемом 750 мл на круговой качалке. В боксе в стерильных условиях в зоне пламени горелки в колбы вносили 150 мл питательной среды, 3 агаровых блоков площадью 0, 5 см² с мицелием гриба (7 суток роста), что соответствовало 0, 0038г сухой массы мицелия, и носитель в количестве 50 см³, что составляло для стальных губок – 6 г. В контрольные колбы вносили 150 мл питательной среды и 3 агаровых блоков площадью 0, 5 см² с мицелием гриба (7 суток роста).

Питательная среда имела следующий состав: мука пшеничная – 29, 0 г/л; кукурузный экстракт – 6, 4 г/л; NH₄NO₃ – 2, 0 г/л; КН₂РО₄ – 1, 3 г/л; вода водопроводная – до 1 л. Для стимулирования продуцирования лакказы в среду был добавлен CuSO₄ в концентрации 0, 05г/л. pH среды до стерилизации – 5, 6-5, 8. Затем колбы инкубировали на круговой качалке с частотой вращения 200 об/мин при температуре 32 º С в течение 10 суток. Опыт осуществляли в трех повторностях.

В результате проведения экспериментов было установлено, что засев поверхностной культурой также является эффективным способом иммобилизации продуцента на твердых носителях. Эффективность иммобилизации оценивали по отсутствию биомассы гриба в культуральной жидкости (рисунок 5).

Рисунок – 5 Иммобилизация мицелия гриба на стальных губках при засеве носителя поверхностной культурой