Лабораторная диагностика

Для исследования активности энзимов чаще всего используется плазма или сыворотка крови. В процессе свертывания крови и последующей ретракции кровяного сгустка высвобождаются биологически активные вещества тромбоцитов, под влиянием которых возрастает активность многих ферментов. Разрушение форменных элементов крови (эритроцитов) обусловливает дальнейшее повышение их активности. Поэтому, например, при исследовании лактатдегидрогеназы (ЛДГ) рекомендуется не допускать гемолиза. Хранение сыворотки сопровождается снижением функциональной способности энзимов. Для большинства из них активность не изменяется при комнатной температуре в течение 6-8 часов. Известно, что многие антикоагулянты изменяют деятельность ферментов. Установлено, что оксалаты подавляют активность ЛДГ, а салицилаты, наоборот, повышают работу аминотрансфераз.

В клинико-диагностических лабораториях методы определения активности ферментов могут быть разделены на две основные группы:

а) состоящие в определении конечного продукта, образовавшегося после известного периода инкубации ферментного препарата (обычно сыворотки) с субстратом в соответствующем буфере. Выполняется путём измерения опытной и контрольной проб. Для этого используется специальная химическая реакция, и учет оптической плотности может быть произведён на обычном фотоэлектроколориметре или на специальных лабораторных анализаторах.

б) методы, с помощью которых в ходе ферментативной реакции непрерывно или периодически определяют потребление субстрата, кофермента или образование метаболита. Это чаще всего используется в экспериментальных лабораториях.

Активность ферментов выражается количеством разрушенного субстрата или образованного в ходе реакции продукта (в моль, ммоль, мкмоль) в пересчёте на один литр сыворотки (плазмы) крови при температуре 37, 30, 25˚ С (SI), либо в международных единицах (Е/л, U/l), а также в каталах (долях катала) на литр, например, мккат/л. Одна единица (U) какого-либо энзима есть то его количество, которое катализирует трансформацию 1 мкмоль субстрата за 1 мин при определенных условиях.

Ферментативный состав биологических субстратов.

Клетка - сложнофункциональная система, регулирующая своё жизнеобеспечение. Многообразие функций клетки обеспечивается пространственной регуляцией определённых метаболических путей. Пространственная регуляция связана со строгой локализацией определённых ферментов в различных органеллах. Так, в ядре находятся ферменты, связанные с синтезом молекул ДНК и РНК, в цитоплазме - ферменты гликолиза, в лизосомах - гидролитические ферменты, в матриксе митохондрий - ферменты ЦТК, во внутренней мембране митохондрий - ферменты цепи переноса электронов и т.д.

Такая субклеточная локализация ферментов способствует упорядоченности биохимических процессов и увеличивает скорость обмена веществ.