Реакция торможения гемагглютинации

Многие вирусы обладают способностью агглютинировать эритроциты строго определенных видов млекопитающих и птиц. Так, вирусы гриппа и эпидемического паротита агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, человека, а аденовирусы — эритроциты крыс, мышей. В связи этим для их обнаружения в материале больных или культурах клеток, эмбрионов и животных ставят реакцию гемагглютинации (РГА). Для этого в лунках плексигласовых планшет готовят двукратно возрастающие разведения вируссодержащих материалов и жидкостей в объеме 0, 5 мл, добавляя к ним по 0, 25 мл 2 % взвеси трижды отмытых изотоническим раствором хлорида натрия эритроцитов. Для контроля спонтанной агглютинации 0, 5 мл эритроцитов смешивают с равным объемом изотонического раствора хлорида натрия. Смеси инкубируют в термостате при температуре 37 °С, при комнатной температуре или же при температуре 4 °С.

Результаты РГА учитывают по характеру агглютинации эритроцитов через30-60 мин, когда они обычно полностью осаждаются в контроле. Положительная реакция обозначается плюсами: «++++» — звездчатой формы осадок с фестончатыми краями в виде «зонтика»; «+++» — осадок с просветами; «++» — осадок с большими просветами; «+» —хлопьевидный осадок, окруженный зоной скомкованных эритроцитов, и «-» — такой же резко очерченный осадок эритроцитов в виде «пуговицы», как и в контроле.

Являясь группоспецифической, РГА не дает возможности определить видовую принадлежность вирусов. Их идентифицируют с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Для ее постановки используют заведомо известные иммунные противовирусные сыворотки, которые в двукратно снижающихся концентрациях разводят в изотоническом растворе хлорида натрия и разливают по 0, 25 мл. К каждому их разведению добавляют равное количество вируссодержащей жидкости при типировании вируса гриппа, например, в четырехкратном титре, т. е. 4 гемаагглютинирующие единицы. Контролем является взвесь вируса в изотоническом растворе хлорида натрия. Планшеты со смесью сывороток и вируса выдерживают в термостате 30 мин или при комнатной температуре 2 ч, затем в каждую из них добавляют по 0, 5 мл 1 % взвеси эритроцитов. Спустя 30—45 мин определяют титр вируснейтрализующей сыворотки (т. е. максимальное ее разведение), вызвавшей задержку агглютинации эритроцитов.

Используют РТГА в серологической диагностике вирусных болезней, в частности гриппа и аденовирусных инфекций. Ставить ее рекомендует так же, как и РН, с парными сыворотками. Четырехкратное нарастан титра антител во второй сыворотке подтверждает предполагаемый диагноз (рис. 10).

Рис. 10. Реакция торможения гемагглютинации