А. Імунологічні тести. Наступні лабораторні показники допомагають встановлювати імунодефіцит при ВІЛ інфекції.

1. Загальна кількість лейкоцитів і лімфоцитів свідчить про лейкопенії, і кількість лімфоцитів звичайно нижче 2 000 / мм3.

2. Дослідження субпопуляцій Т лімфоцитів. Абсолютний зміст Т4 кліток буде звичайне менше 200 / мм3. Сотношеніє Т4: Т8 різко понизить.

3. Число тромбоцитів указує на тромбоцитопенію.

4. Підвищені рівні IGG і IGA.

5. Клітинний імунітет, що понизив, виявляється шкірними пробами.

6. Біопсія лимфоузлов виявляє глибокі аномалії.

В. Специфічні тести на ВІЛ інфекцію. Вони включають виявлення антигенів ВІЛ і антитіл до них і виділення вірусу.

1. Виявлення антигена. Динаміка появи антигенів, що виявляються, і антитіл після ВІЛ інфекція загалом така. Після однократного масивного зараження, наприклад при переливанні крові, вірусні антигени (р24) можуть бути виявлені в крові приблизно за два тижні. IGM антитіла з'являються приблизно через 4-6 тижнів, за них слідують IGG антитіла.

Якщо інфікуюча доза мала, наприклад, після уколу голкою, процес може бути значне відстрочений. Поява р24 антигенемії і вірусемії, супроводжуваній ранньою гуморальним імунною відповіддю співпадає з гострим захворюванням або хворобою сероконверсії. Згодом р24 антиген зникає з кровообігу і відсутній протягом тривалої бессимптомной стадії, знову з'являвшись лише у разі розвитку явного важкого захворювання. Тести на визначення антигена доступні лише в спеціалізованих лабораторіях і тому звичайно не використовуються.

2. Виділення вірусу. Після зараження людина залишається інфікованим доВІЛно. Вірус є присутнім в струмі крові і рідинах організму, головним чином всередині лімфоцитів, але деякі також і позаклітинний. Титри вірусу високі на ранніх етапах інфекції приблизно за тиждень до початку появи антитіл. Антитіла не нейтралізують вірус, і вони одночасно можуть знаходитися в організмі. Під час стадії бессимптомної інфекції титри вірусу низькі і не можуть бути виявлені, але коли розвивається клінічно виразимий СНІД титри знов підвищуються. Інфікована людина тому може бути заразливим весь час, але інвазивна здатність є найвищою в ранній стадії інфекції (коли тести на антитіла негативні і випадок не може бути виявлений при скринінгу) і знов, коли людина стає клінічно хворою.

Хоча вірус є присутнім в багатьох місцях організму, він найбільш легко виділяється з лімфоцитів периферичної крові. Техніка ізоляції – кокультивування лімфоцитів пацієнта з неінфікованими лімфоцитами у присутності интерлейкина -2. Реплікація вірусу може бути виявлена по активності зворотній транскриптази, а також по виявленню в системі вірусних антигенів. Проте, виділення вірусу не є широко використовуючим тістом. Дослідження може бути позитивним лише у частини осіб, інфікованих ВІЛ. У зв'язку з високим ризиком зараження виділення вірусу повинне робитися лише в лабораторіях з відповідним режимом.

3. Виявлення антитіл. Виявлення антитіл є найпростішим і найбільш широко використовуючим методом для діагнозу ВІЛ інфекції. Проте, необхідно підкреслити, що антитіла можуть з'явитися через декілька тижнів або місяців після інфікування, а людина може бути заразливою вже в кінці цього періоду. Ця сеіронегативна стадія відома як період вікна. Внаслідок цього скринінг антитіл не цілком надійний для визначення заразливих осіб, наприклад, з числа донорів. Було зареєстрований багато випадків передачі ВІЛ при переливанні крові від сіронегативних донорів. Встановлено, що після статевого контакту з віл-інфікованим антитіла з'являються, якщо мало місце зараження, лише через 2-6 місяців. Тому тестування антитіл через шість місяців може допомогти встановити інфікованість після однократного статевого контакту з віл-інфікованим

Після появи антитіл їхні титри зростають і спектр розширяється протягом наступних декількох місяців. IGM антитіла зникають через 8-10 тижнів, тоді як IGG антитіла залишаються. Коли імунодефіцит стає важким унаслідок розвитку клінічного СНІДУ, деякі компоненти анти-ВІЛ антитіл можуть зникати (наприклад, анти - р24).

Серологічні тести на анти-ВІЛ антитіла можуть бути двох типів: скринінгові і підтверджуючі тести.

Скринінгові тести володіють високою чутливістю, мають широкий реакційний спектр, прості в постановці і можуть бути автоматизовані для обробки великих кількостей зразків одночасно. Вони не є високоспецифічними і можуть давати деяку кількість помилковопозитивних результатів. Всі сироватки, позитивні в скринінгових тестах, перш ніж оголошуватися позитивними повинні бути перевірені підтверджуючими тестами. Найбільш широко використовуюча проба для скринінгового тестування – ІФА.

ІФА. Прямий твердофазний метод ІФА - найбільш часто використовуючий метод. Антиген, отриманий з ВІЛ, який вирощують на лінії кліток Т-лімфоцитів, що перевивається, або рекомбинантними методами, фіксується в лунках мікротитратора або іншій відповідній твердій поверхні. Добавляють досліджувану сироватку, і, якщо антитіла є присутніми, вони зв'язуються з антигеном. Після відмивання від незв'язаної сироватки добавляють антилюдський імуноглобулін, пов'язаний з відповідним ферментом, а потім – субстрат, змінюючий колір при дії ферменту. Якщо випробовувана сироватка містить анти- ВІЛ антитіла, відбувається видиме або виявляється фотометрично зміна кольору, яка може реєструватися візуально або спеціальними ІФА-РІДЕРАМІ..

ІФА є простим і відносно недорогим методом, але помилковопозитивні реакції нерідкі, особливо з сироватками, що містять ревматоїдний чинник або антилімфоцитарні антитіла Сироватки, що зберігаються тривалий час, містять неспецифічні «липкі» імуноглобулини. Плазма дає частіше помилковопозитивні результати, ніж сироватка в реакції аглютинації. Особи з деяких регіонів миру можуть виявляти неспецифічні реакції за рахунок перехресний реагуючих антитіл до поширених в цій місцевості ретровірусам, не є ВІЛ.

Більш специфічні модифікації ІФА, в яких антитіла досліджуваної сироватки або конкурують з конюгованим з ферментом анти- ВІЛ антитілами, або фіксуються антилюдським імуноглобуліном до твердої фази. Доступно також виявлення IGM антитіл методом ІФА.

Тест Карпаса – імунопероксидазна реакція на склі. Інфіковані ВІЛ клітки, прикріплені до покритої тефлоном лунки в наочному склі, обробляються спочатку досліджуваною сироваткою, а потім з міченим пероксидазой хріну антилюдським імуноглобуліном. Потім добавляють відповідний субстрат, який дає кольорову реакцію, якщо тест є позитивним. Тест простий і недорогий, але оцінка його суб'єктивна.

Підтверджуючим тістом, найбільш часто використовуючим, є імуноблотинг (вестерн блот). В цьому тісті білки ВІЛ, розділені у відповідності з їхньою электрофоретической рухливістю і молекулярною масою методом электрофорезу в полиакриломидному гелі, переносяться на нитроцеллюлозну мембрану. Такі смужки (стрипи) обробляють досліджуваною сироваткою, а потім з міченим ферментом антилюдським імуноглобуліном. Потім добавляють відповідний субстрат, який дає видиму кольорову смугу там, де специфічне антитіло реагувало з розділеним вірусним білком. Положення смуги на стрипе указує на антиген, з яким прореагувало антитіло. В позитивній сироватці смуги будуть виявлятися з багатьма білками, типово - з р24 ( ген gag, капсидний білок), р31 (pol ген, зворотна транскриптаза) і gp41, gpl20 або gpl60 (env ген, оболонкові антигени). Проте, інтерпретація стає скрутною, коли смуги з'являються лише в одному або двох місцях, як наприклад, з р24 або gpl20. Це може траплятися на ранній стадії інфекції, але може також бути і неспецифіїческим. Вестерн блот - дуже корисний підтверджуючий тест, але інтерпретація його залишається суб'єктивній і вимагає значного досвіду. Невизначені результати нерідкі.

Позитивний результат в будь-якому скринінговому тісті не може бути ухвалений без підтвердження. На практиці для підтвердження використовувався імуноблотинг, який розглядався в якості «золотого стандарту». Проте, оскільки тест є громіздким, дорогий і труднодоступний, на практиці в даний час є потрібним виконання або двох різних типів ІФА, або ІФА з одним з швидких тестів. Сироватка, позитивна в обох тестах розглядається як позитивна. У разі сумніву необхідне проведення повторного тестування через 2-3 місяця.

Окрім постановки діагнозу ВІЛ інфекції, лабораторія повинна ідентифікувати опортуністичні інфекції, які є характерними для СНІДУ. Для цього достатні звичайні мікробіологічні дослідження. Проте, серологічна діагностика опортуністичних інфекцій не може бути завжди надіною при СНІДі, оскільки утворення антитіл може бути порушено у зв'язку з імунодефицитностью.