Диско-диффузионный метод

На поверхность плотной питательной среды, засеянной сплошным газоном исследуемой культурой, накладывают не более 6 дисков, пропитанных антибиотиками, на расстоянии не менее 2 см друг от друга. Регистрация результатов проводится через 18-24 часов инкубирования в термостате по диаметру зоны отсутствия роста вокруг дисков с антибиотиками. Наличие роста вокруг диска свидетельствует о нечувствительности данного микроба к антибиотику. Для интерпретации результатов используются специальные таблицы.

Рисунок 1. Определение чувствительности

микроорганизмов диско-диффузионным методом:

1 – микроорганизм чувствителен к антибиотику;

2 – микроорганизм умеренно резистентен к антибиотику;

3 – микроорганизм устойчив к антибиотику.

Метод Е-тестов Принцип метода. Определение чувствительности микроорганизма проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов

Метод серийных разведений в бульонной среде Берут 9 пробирок, содержащих 1 мл бульона Мюллер-Хинтона. Одна из них служит контролем роста бактерий, а в остальных готовят двукратные серийные разведения антибактериального препарата. Например, 32 мг/л – 1-я, 16 мг/л – 2-я, 8 мг/л – 3-я, 4 мг/л – 4-я и т.д. Затем в каждую пробирку вносят 0, 1 мл испытуемой бактериальной суспензии. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч., отсутствие помутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика (в мкг/мл или мг/л), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.

2► Определение чувствительности разных штаммов стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков

Исследуемая культура является чувствительной (S), умеренно устойчивой к (I), устойчивой (R) _.

Достоинства метода: Легко воспроизводимый метод Недостатки метода: качественный метод, не позволяет определить МПК препарата./

3► Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) пенициллина методом серийных разведений.

Вывод: МПК пенициллина для исследуемого штамма составляет (см. рисунок № 3) 4 мг/мл