Лабораторный практикум

ВЫДЕЛЕНИЕ И КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ГЛИКОГЕН.

Гликоген представляет собой разветвленный, внутриклеточно локализованный гомополисахарид животных тканей. В составе гликогена остатки Д-глюкозы соединены a-1, 4-гликозидными связями в длинные цепи, ветвящиеся в результате образования a-1, 6-связей. Молекулярная масса колеблется от 10⁶ до 10⁹ дальтон.

В печени человека при нормальном питании запасается в среднем 80-120г гликогена. При голодании в течение суток почти весь запас гликогена расходуется и его не удается обнаружить обычными качественными реакциями.

Реактивы. 5% р-р трихлоруксусной кислоты; этиловый спирт; сульфат аммония (в порошке); 10% р-р ацетата свинца; р-р Люголя; физиологический раствор.

Принцип. Метод основан на том, что гликоген хорошо растворим в воде и достаточно устойчив в слабокислой среде.

Ход работы.

1. В опыте используют печень сытого и голодавшего животных. Печень забитых животных быстро извлекают, разрезают на тонкие пласты и немедленно опускают в стаканы с кипящим физиологическим раствором для инактивации фермента фосфорилазы гликогена, очень активно разрушающего гликоген. Через 10-15 мин печень извлекают из раствора. Дальнейшее исследование печени сытого и голодавшего животных проводится параллельно.

2. Отвешивают на весах 0, 5г печени, помещают в ступку, заливают 3мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты и растирают в течении 10 минут. Затем к экстракту приливают 3мл дистиллированной воды, суспензию перемешивают и фильтруют через смоченный водой бумажный фильтр в чистую пробирку.

3. С полученными фильтратами выполняют качественные реакции на гликоген.

а) в одну пробирку наливают 1мл дистиллированной воды, во вторую и третью пробирку - по 1 мл фильтратов. После этого в каждую пробирку добавляют по 1-2 капли раствора Люголя и сравнивают окраску.

б) в три пробирки наливают по 10 капель фильтрата, полученного из печени сытого животного, и проделывают реакции осаждения. Для этого в первую пробирку приливают 10 капель этилового спирта, во вторую 10 капель 10% раствора ацетата свинца, в третью - насыпают порошок сульфата аммония до полного насыщения (т.е. до тех пор, пока на дне пробирки останутся не растворяющиеся кристаллы соли). Наблюдают: выпадает ли осадок.

Те же реакции выполняют с фильтратом, полученным из печени голодавшего животного.

Результаты работы занести в таблицу и сделать соответствующие выводы.

Выводы.