Методы окраски отдельных групп про- и эукариот

Для окраски отдельных групп микроорганизмов используют специальные методы окраски: Романовского-Гимзы, Здродовского и др.

Метод Романовского-Гимзы. Относится к сложным, универсальным методам окраски Его применяют для обнаружения нуклеоида бактерий, а также окраски спирохет, хламидий, риккетсий, простейших и мазков крови. Этапы окраски:

1. На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды), состоящего из смеси основного метиленового синего, азура и кислого эозина на 10-20 минут.

2. Препарат промыть и высушить.

ДНК нуклеоида окрашивается метиленовым синим и азуром в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма клетки - эозином в розовый цвет. Представители разных родов спирохет окрашиваются в разные цвета по методу Романовского-Гимзы: боррелии – в сине-фиолетовый, трепонемы – бледно-розовый (T.pallidum – бледная трепонема), лептоспиры – красно-розовый.

Метод Здродовского используется для окраски риккетсий, являющихся облигатными внутриклеточными паразитами и вызывающими различные риккетсиозы. Этапы окраски:

1. Окрасить мазок разведенным фуксином Циля (10-15 капель на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 минут, промыть водой

2. Обработать мазок 0, 5% раствором лимонной кислоты или 0, 01% раствором хлористоводородной кислоты, промыть водой.

3. Окрасить метиленовым синим в течение 1 минуты.

4. Промыть водой и высушить препарат.

Риккетсии, окрашенные по методу Здродовского, имеют красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют – голубая, ядра – синие.

3. Изучение подвижности микроорганизмов

Для изучения подвижности микроорганизмов используют нативные препараты, приготовленные по методу «висячей» и «раздавленной капли».

Метод «висячей капли». Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю исследуемого материала. Затем специальное предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для микроскопии вначале используют объектив малого увеличения (8х или 10х), находят край капли, а затем устанавливают объектив 40х или иммерсионный и исследуют препарат.

Метод «раздавленной» капли. На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла.