И способы их окрашивания.

Мазки-препараты готовят из патологического материала (например, из гноя, мокроты, фекалий), колоний или из налёта чистых культур бактерий, и грибков, выросших на питательных средах в чашках Петри или пробирках. Делают мазки на предметных стёклах, как правило, бактериальной петлей (диаметр 3x2 мм) из нихромовой проволоки, конец которой закрепляют зажимом в специальном петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Для изготовления мазков необходима газовая горелка или спиртовка, ванночка с подставкой (мостик) для стёкол, промывалка с водой, флакон с физиологическим раствором, красители, фильтровальная бумага, банки с дезинфицирующим раствором для обезвреживания отработанных препаратов, пипеток, материалов и рабочего стола.

Этапы приготовления мазка:

1. Исследуемые материалы и культуры микробов берут бактериальной петлёй, которую стерилизуют в пламени горелки. При введении петли в пробирки и колбы стерилизуют также верхнюю часть петледержателя. Края горлышка пробирки стерилизуют в пламени горелки и почти одновременно обжигают петлю, которую быстро вводят внутрь пробирки, охлаждают и прикасаются к налёту на скошенном питательном агаре или же погружают её в культуру. Затем петлю извлекают, быстро обжигают край пробирки и, закрывают пробкой и ставят пробирку в штатив.

2. Налёт чистой культуры микробов или колонию эмульгируют в капле воды на предметном стекле и круговыми движениями петли равномерно распределяют на площади 1, 0 - 1, 5 см. Точно такого же размера готовят мазок из бульонной культуры, гноя, мокроты и др. материалов, которые не взвешиваются в воде. Хорошо приготовленные мазки имеют округлую форму, быстро высыхают при комнатной температуре, более толстые -высушивают в термостате или подогревают над пламенем горелки, не допуская свёртывания белка бактерий и нарушения их структуры.

3. Высушенные мазки фиксируют 5 - 6 секунд в пламени спиртовки для того, чтобы убить микробов, закрепить их на предметном стекле и предотвратить смыв при ополаскивании во время окраски мазка.

Для приготовления мазков из гноя и мокроты, вязких консистенций пользуются двумя предметными стеклами. На середину одного из них наносят небольшое количество материала, который покрывают вторым стеклом так, чтобы осталась свободной треть первого и второго стекол. Раздвигают стекла в стороны, получают два больших мазка одинаковой толщины.

Мазки из крови готовят следующим образом. Стерильной иглой для инъекций делают укол на предварительно продезинфицированном безымянном пальце левой руки. Первую каплю крови удаляют ватой, вторую наносят на край хорошо обезжиренного предметного стекла. Мазки делают узким шлифовальным стеклом, установленным под углом 45 градусов, продвигая его вдоль предметного стекла влево, не доходя до края.

Препараты-отпечатки из внутренних органов трупов, мяса, колбасных изделий, получают, прикасаясь предметным стеклом к поверхности разрезов, выполненных стерильным скальпелем.

4. Фиксированные мазки окрашивают кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли - основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.

Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводят его дистиллированной водой.

После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного

объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

При сложных методах окраски мазков применяют два-три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Грамму, Цилю - Нельсену, Нейссеру, Бурри - Гинсу, Романовскому - Гимзе и некоторые другие.

Мазок для люминесцентной микроскопии готовят обычным образом, фиксируют в ацетоне 5-10 минут и наносят на него флюорохром на 20- 30 минут. Сделанный препарат 15-20 минут промывают проточной водой, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Для электронной микроскопии вместо предметных стёкол применяются тонкие плёнки-подложки, незначительно поглощающие электроны.

Они крепятся на опорные сетки. Исследуемый материал, тщатеьно

очищенный от различных примесей, наносят на плёнку.

Высушенный препарат микроскопируют.

Контрольные вопросы.

1. Как приготовить мазок препарата?

2. Назовите цели и способы фиксации мазков?

3. Назовите основные красители?

4. Какими методами изучают подвижность микроорганизмов?

5. Назовите и охарактеризуйте сложные методы окрашивания?