Реакция на ароматические аминокислоты (реакция нитрования).

Занятие № 1.

«Строение, свойства и функции белков».

Инструктаж по технике безопасности при работе в биохимической лаборатории.

2. Тема занятия: «Строение, функции и свойства белков».

3. Вопросы для контроля:

1) Место биохимии среди других наук.

2) История развития биохимии белков.

3) Пептидная теория строения белков (основные аминокислоты, их классификация, нестандартные аминокислоты, пептидная связь).

4) Первичная структура белков (аминокислотная последовательность, экспериментальное определение последовательности аминокислот).

5) Вторичная структура белков (a-спираль и b-слой; взаимодействия, стабилизирующие вторичную структуру).

6) Третичная структура белков и взаимодействия, стабилизирующие ее.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1

Тема: «Получение яичного альбумина».

Яичный белок представляет собой 10%-ный водный раствор нескольких белков и, в противоположность желтку, не содержит в заметных количествах других органических соединений, таких как липиды и углеводы. Это заметно упрощает процедуру выделения белков. Почти 70% яичного белка составляет яичный альбумин, который легко отделить от глобулиновой фракции путем 10-кратного разведения яичного белка дистиллированной водой. В этом случае белки глобулиновой фракции выпадают в осадок и их легко отделить от раствора фильтрованием или центрифугированием. Яичный альбумин остается в растворе.

Материал исследования: Белок куриного яйца, 1%-ный раствор желатина.

Реактивы: Дистиллированная вода, 10%-ный и 30%-ный растворы NaОН, азотная

кислота конц., 5%-ный раствор ацетата свинца, 1% р-р CuSO₄.

Оборудование: 1. Химические стаканы на 500 и 100 мл

2. Цилиндры на 500 и 250 мл

3. Мерные колбы на 100 мл

4. Воронки

5. Стеклянные палочки

6. Фильтры.

7. Штативы с пробирками, пипетки, спиртовки.

Ход работы.

1. Чтобы отделить белок от желтка, осторожно проделывают отверстие в скорлупе с двух концов и выливают белок в стакан на 500 мл. В тот же стакан приливают 250 мл дистиллированной воды и содержимое тщательно перемешивают стеклянной палочкой.

2. Затем раствор переносят в мерный цилиндр и объем раствора доводят до 300 мл добавлением дистиллированной водой. Раствор оставляют на 30 мин при комнатной температуре для образования хлопьевидного осадка глобулинов.

3. 15 мл полученной суспензии фильтруют через фильтр. Фильтрат, содержащий яичный альбумин используют для дальнейших работ.

Анализ аминокислотного состава. Цветные реакции на белки.

Реакция на ароматические аминокислоты (реакция нитрования).

При нагревании с крепкой азотной кислотой растворы белка дают желтое окрашивание. Реакция обусловлена наличием в белках ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина, триптофана) и основана на образовании нитропроизводных этих аминокислот.

После подщелачивания раствора NH₄OH или NaOH желтое окрашивание переходит в оранжевое окрашивание.